[发明专利]外泌体多组学标志物的定量检测方法

权利要求书

1.一种外泌体多组学标志物的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

提供一包含外泌体的生物样本，所述外泌体包括位于表面的至少一种蛋白分子和位于内部的核酸分子；

提供复合探针，所述复合探针包括DNA分子片段和与所述蛋白分子相应的特异性抗体，所述DNA分子片段的序列与所述特异性抗体对应；

将所述复合探针加入所述生物样本中，使得所述外泌体表面的每一种所述蛋白分子与相应的所述特异性抗体结合，从而得到一混合液；

去除所述混合液中游离的所述特异性抗体以及游离的所述DNA分子片段，从而分离出标记有所述DNA分子片段的外泌体；

提取标记有所述DNA分子片段的外泌体内的所述核酸分子以及所述DNA分子片段；以及

对所提取的所述核酸分子以及所述DNA分子片段同时进行定量分析；

其中，所述复合探针的制备方法包括如下步骤：

分别在所述DNA分子片段与所述特异性抗体上标记生物素；

分别将所述DNA分子片段上的生物素以及所述特异性抗体上的生物素转变成生物素化分子；以及

通过链霉亲和素将所述DNA分子片段上的所述生物素化分子以及所述特异性抗体上的所述生物素化分子进行结合，从而得到所述复合探针。

2.如权利要求1所述的外泌体多组学标志物的定量检测方法，其特征在于，对所述核酸分子以及所述DNA分子片段同时进行定量分析的方法包括荧光定量PCR、数字PCR、PCR结合电泳、基因测序以及基因芯片中的至少一种。

3.如权利要求1所述的外泌体多组学标志物的定量检测方法，其特征在于，通过一提纯芯片去除所述混合液中游离的所述特异性抗体以及游离的所述DNA分子片段，所述提纯芯片包括两个相对设置的过滤膜，每一所述过滤膜包括至少一滤孔，所述滤孔的孔径小于标记有所述DNA分子片段的外泌体。

4.如权利要求1所述的外泌体多组学标志物的定量检测方法，其特征在于，在提取标记有所述DNA分子片段的外泌体内的所述核酸分子以及所述DNA分子片段之前，还包括：

对所述外泌体进行裂解；

其中，裂解所述外泌体的方法包括TRIzol试剂法、硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法以及硫氰酸胍法中的至少一种。

5.如权利要求1所述的外泌体多组学标志物的定量检测方法，其特征在于，所述蛋白分子包括CD9、CD63、CD81、Alix、TSG101、膜粘连蛋白、EpCAM、人表皮生长因子受体-2蛋白以及前列腺特异性抗原蛋白中的至少一种。

6.如权利要求1所述的外泌体多组学标志物的定量检测方法，其特征在于，所述DNA分子片段包括10-500个碱基对。

7.如权利要求1所述的外泌体多组学标志物的定量检测方法，其特征在于，所述核酸分子包括DNA和RNA，定量分析所述RNA还包括逆转录PCR。

8.如权利要求1所述的外泌体多组学标志物的定量检测方法，其特征在于，将每一种所述特异性抗体加入所述生物样本中后混合的时间大于30min。