[发明专利]一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN）的方法

权利要求书

1.一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）样品的准备：将新鲜工业大麻花叶样品于烘箱中60℃下干燥，粉碎机粉碎，混匀待测；

（2）样品的前处理：准确称取花叶样品于离心管中，加入有机溶剂，超声提取，离心收集上清液，残渣重复超声提取一次，离心，合并上清液，浓缩定容得到样品处理待测液；

（3）标准工作溶液的配置：将购买得大麻酚（CBN）标准溶液用甲醇稀释至浓度范围为1μg/mL～100μg/mL的标准工作溶液，其浓度范围覆盖试样中待测组份的含量；

（4）用高效液相色谱法（HPLC法）测定：利用HPLC对标准工作溶液和样品处理液进行检测，测定方法是以标准工作溶液目标物的色谱峰面积对其相应浓度进行回归分析，得到标准曲线；对制备好的样品进行测定，测得检出目标物的色谱峰面积，代入标准曲线，得到样品中待测组分的浓度，进而计算得其含量；若样品处理液浓度超过标准工作溶液浓度范围，则稀释后再检测。

2.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法，其特征在于，所述高效液相色谱仪（HPLC）条件如下：流动相为乙腈（色谱纯）和水（去离子水），乙腈与水的比例为65%：35%，等度洗脱，流速为1mL/min；进样量为10uL；柱温为30℃；检测器检测波长为220 nm。

3.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法，其特征在于，所述大麻花叶为9月采摘的成熟工业大麻的叶和花苞组合物，60℃干燥至水分小于5%，粉碎机粉碎至20目。

4.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法，其特征在于所述有机溶剂为色谱纯甲醇，甲醇所用体积量与花叶样品质量比为10:1；所述超声时间为20min，超声功率为250W，工作频率为40kHz；所述离心的转速为10000转/分钟，时间为5分钟。

5.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法，所述配制浓度范围为1μg/mL～100μg/mL的CBN标准工作溶液步骤为：

①将购自美国Sigma公司的CBN标准物质（1mg/mL，共1mL）转移至10mL容量瓶中，用色谱级甲醇洗涤原瓶及滴管数次，并全部转移至容量瓶中（注意转移过程中不能洒出），定容，得CBN溶液浓度为100μg/mL；

②用移液管分别吸取100μg/mL的CBN标准溶液2mL、1mL、1mL分别至5mL、5mL、10mL的容量瓶中用甲醇定容得到40μg/mL、20μg/mL、10μg/mL的CBN标准溶液；

③用移液管吸取40μg/mL的CBN标准溶液1mL至10mL的容量瓶中用甲醇定容得到4μg/mL的CBN标准溶液；

④用移液管吸取10μg/mL的CBN标准溶液1mL至10mL的容量瓶中用甲醇定容得到1μg/mL的CBN标准溶液。

6.根据权利要求1所述的一种利用HPLC检测工业大麻中大麻酚（CBN)的方法，其特征在于所述高效液相色谱仪品牌型号为安捷伦1260；色谱柱为Agilent ZORBAX Eclipse PlusC18；所述检测器为二极管阵列检测器(简称DAD检测器)。