[发明专利]Kctd10基因在治疗肝脏疾病中的应用

说明书

本发明涉及基因的应用领域及试验用的医药配制品，具体涉及肝干细胞调控基因Kctd10在小鼠肝脏中特异性敲除模型的建立、鉴定方法、并应用于治疗肝脏疾病药物筛选以及治疗肝脏疾病。利用FLP/Frt，Cre/Loxp重组酶系统首先构建了Kctd10^flox/flox的小鼠模型，再将该小鼠模型与Alb‑cre+转基因小鼠品系杂交，获得了Kctd10肝脏特异性基因敲除品系，并予以证实。本发明为人类肝干细胞疾病研究提供在体动物模型，为深入了解肝病发生提供有效的研究途径和方法，为特异性治疗肝脏疾病提供了药物筛选方法，也为治疗肝脏疾病奠定基础。

技术领域

本发明涉及基因的应用领域，涉及体内试验使用的医药配制品。具体涉及肝干细胞调控基因Kctd10在小鼠肝脏中特异性敲除模型的建立、鉴定方法、应用于治疗肝脏疾病药物筛选以及治疗肝脏疾病。

背景技术

肝干细胞的功能和特性与肝脏疾病发生和发展密切相关：在肝受损情况下，肝干细胞发生增殖、分化，维持肝脏的正常功能，肝干细胞实际是肝细胞在特定环境下的一种功能状态。肝干细胞具有自我复制和双向分化潜能，有望成为严重肝疾患细胞替代疗法以及构成生物人工肝的供体细胞，从而成为当前的研究热点之一。研究肝干细胞的分子发育机制并建立相关动物模型对于临床肝病治疗、药物研究等具有非常重要的意义。小鼠模型是研究肝干细胞形成与分化的理想模型。国际同行在小鼠体内敲除关键基因导致肝干细胞过分增殖、干细胞标记基因表达变化而诱导小鼠肝癌的产生。

KCTD10(potassium channel tetramerisation domain-containing 10)是一个钾离子四聚体通道蛋白，属于PDIP1(polymerase delta-interacting protein 1)基因家族。这个基因家族在蛋白结构上高度相似，N端具有共同的BTB/POZ和K-tetra结构域，而在C端则有非常保守的PCNA结合位点。Kctd10基因在进化上高度保守，并在人、牛、小鼠、鸡、非洲蟾蜍及斑马鱼等中编码高度保守的蛋白质。目前，Cre/loxp重组酶系统是用于条件性基因敲除中的基因定位重组系统。发明人惊奇地发现，通过条件性基因敲除小鼠，首先把两个loxP位点放到目的基因的一个或几个重要外显子的两侧构建成嵌合小鼠，再与特定组织中表达Cre酶的小鼠进行杂交，可将两个方向相同的LoxP之间的序列剔除，而不表达Cre酶的组织或细胞不会发生这种剔除现象，从而实现在特定组织或细胞中敲除基因，同时该基因在其他组织或细胞中的表达不受影响的目的。这样可避免胚胎致死性基因对小鼠生长发育的影响，从而能更好地研究基因及其在特定组织或细胞中的生理病理功能的关联性，进而得到本发明创造。

发明人首先建立了Kctd10 Flox(简称Kctd10^flox/+)敲除小鼠模型，该小鼠与EIIa-Cre交配获得的纯合Kctd10敲除小鼠在胚胎期死亡，并证明该蛋白调控Notch信号通路。为了进一步研究KCTD10在肝脏中的生物学功能，探明KCTD10对肝脏干细胞影响机制，本研究利用FLP/Frt，Cre/Loxp重组酶系统首先构建了Kctd10^flox/flox的小鼠模型，再将该小鼠模型与Alb-cre+转基因小鼠品系杂交，获得了Kctd10肝脏特异性基因敲除品系。

本发明为人类肝干细胞疾病研究提供在体动物模型，为深入了解肝病发生提供有效的研究途径和方法，为特异性治疗肝脏疾病提供了药物筛选方法，也为肝脏疾病的基因治疗奠定基础。

发明内容

本发明旨在提供一种肝干细胞调控基因肝脏特异性敲除小鼠模型的构建方法。

本发明另一个目的为提供肝干细胞调控基因肝特异性基因敲除小鼠模型的应用。

本发明目的在于为特异性治疗肝脏疾病提供了药物筛选方法。

Kctd10基因在治疗肝脏疾病中的应用，为非治疗非诊断的用途。