[发明专利]一种Rta蛋白优势表位抗原及其应用

说明书

本发明公开了属于基因工程技术领域的一种Rta蛋白优势表位抗原及其应用。本发明的Rta蛋白优势表位抗原，其序列为序列表中SEQ ID NO.1‑4任一所示氨基酸序列。本发明的Rta优势表位抗原产量高、纯度高、活性好、特异性显著提高，完全适用于研制抗Rta抗体免疫检测试剂的需求。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种Rta蛋白优势表位抗原及其应用。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是能普遍感染人类且与多种恶性肿瘤发病有密切关系的DNA疱疹病毒，主要通过唾液、飞沫传播，也可经输血液传播，EB病毒易感染B淋巴细胞，并可在口咽部上皮细胞内增殖。机体感染EB病毒后，可以产生传染性单核细胞增多症、EB病毒相关性噬血细胞综合征及X连锁淋巴组织增生性疾病等多种疾病。EBV相关的恶性肿瘤包括血液系肿瘤和非血液系恶性肿瘤。前者如Burkitt淋巴瘤、移植后B细胞淋巴增殖性疾病、T细胞淋巴瘤、NK细胞淋巴增殖性疾病和NK细胞淋巴瘤/白血病、霍奇金病等，后者包括鼻咽癌、胃腺癌、平滑肌肉瘤等。

在国际癌症研究中心1999年致癌因子的分类标准中，EB病毒已经被明确列为第1类致癌物，尤其是鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)。NPC是发生于鼻咽粘膜的恶性肿瘤，是第一个被发现与EB病毒感染密切相关的人类癌症，在大部分角化鳞状细胞癌和几乎所有未分化的鳞状细胞癌都有EB病毒的存在。据世界卫生组织统计，约80％的鼻咽癌发生在中国，尤其是广东省，成为一种区域性的高发肿瘤，发病率高达(15～50)/10万，每年最少有80 000例新患者，死亡率达(10～13)/10万，因此我国已经将鼻咽癌列为重点预防和治疗的恶性肿瘤之一。晚期鼻咽癌患者病死率极高，5年生存率仅20％左右。即使生存，也因多次放疗和化疗带来的严重不良反应而使患者无法同健康人一样生活。早期鼻咽癌治疗效果好，放疗和化疗周期可以缩短而使患者少受不良反应之苦，5年生存率高于85％，可见鼻咽癌早期诊断是提高治疗效果、争取良好预后的关键。提高早期无症状鼻咽癌检出率是医务人员追求的目标，抓住最佳治疗时机，定期体检和筛查是提高鼻咽癌早诊率、降低病死率的最好方法。

根据我国流行病学资料和EB病毒感染后产生抗体的基础理论证实，几乎所有40岁以上的人群均感染过EB病毒，80％以上的健康成人是EB病毒携带者。与健康成人比较，鼻咽癌患者血清中各种EB病毒抗体水平普遍较高，并呈持续升高或保持高滴度，这一血清学特征在鼻咽癌临床症状出现之前即可检出。

Rta蛋白是EB病毒由潜伏期到裂解期转变时，由立即早期基因BRLF1编码的605个氨基酸产物，是EB病毒由潜伏期转向裂解期的关键性调控因子，它能引起一系列的裂解早期基因的相继表达，最终引发EB病毒裂解感染。Rta蛋白血清抗体主要有IgA和IgG，IgA抗体能反映病毒近期感染的情况，但IgG抗体的半衰期比IgA抗体更长，为保证足够的灵敏度对于周期时间较短的立即早期蛋白应选择IgG抗体，故目前临床上常采用Rta/IgG抗体作为筛查指标，且一致认为血清Rta/IgG抗体是较为适合NPC初期筛查及诊断的指标之一。Rta蛋白在淋巴细胞中的表达相对稳定，鼻咽癌患者血清中Rta/IgG抗体水平在不同的T、N、M分期以及临床分期均无明显区别。Feng等在大肠杆菌中表达了Rat融合蛋白，并用Western blot方法鉴定出Rat蛋白的表位主要位于蛋白的c端2/3部分。任军等在大肠杆菌中表达并纯化了不含任何外源标签的Rat蛋白的C端部分(179-605位氨基酸，Rta C 2/3)，用纯化的蛋白作为抗原建立间接EILSA法检测人血清中的特异性抗体。Feng等又进一步研究了BRLF1基因中抗原决定簇丰富且抗原性高、与人类蛋白质没有同源性的区域，即BRLF1-185I(187-356aa)和BRLF1-150I(384-534aa)两个片段，并用分子克隆的方法构建出融合的原核表达载体。获得两种重组融合蛋白质，将两种融合蛋白混合作为抗原，以间接ELISA的方法，分别检测了51例鼻咽癌病人和47例正常对照组血清样品中Rta-IgG，结果在51例鼻咽癌病人血清中，有42例表现为Rta-IgG阳性，灵敏度为82.3％。而在47例正常人血清中，只有5例(10.6％)表现为Rta-IgG阳性，特异性为89.4％。