[发明专利]一种表达芳樟醇合成酶的融合基因及其应用

权利要求书

1.一种表达芳樟醇合成酶的融合基因，其特征在于，所述融合基因自5’端至3’端依次包括启动子-核糖体结合位点RBS-融合标签-芳樟醇合成酶基因bLIS；

所述芳樟醇合成酶基因bLIS来源于棒状链霉菌，所述芳樟醇合成酶基因bLIS的N端还包括C29修饰，所述C29修饰的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示，所述C29修饰来源于肠炎沙门氏菌的氯霉素乙酞转移酶；所述芳樟醇合成酶基因bLIS的序列如SEQ ID No.4所示；

所述核糖体结合位点RBS的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.一种包含权利要求1所述融合基因的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体的基础表达载体为pETDuet-tac。

3.权利要求2所述重组表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）对所述芳樟醇合成酶基因bLIS进行密码子优化，将优化后的芳樟醇合成酶基因插入表达载体pETDuet-tac，获得重组质粒pETDuet-tac-bLIS；所述优化后的芳樟醇合成酶基因的序列如SEQ ID No.4所示；

（2）将所述SEQ ID No.1所示的核苷酸序列分别取代质粒pETDuet-tac和重组质粒pETDuet-tac-bLIS中的原始RBS序列，得到重组质粒pETDuet-tac-max和 pETDuet-bLIS-max；

（3）利用所述C29修饰芳樟醇合成酶bLIS，得芳樟醇合成酶融合蛋白C29*bLIS，利用所述芳樟醇合成酶融合蛋白C29*bLIS的编码基因取代芳樟醇合成酶基因bLIS，得到重组质粒pETDuet-tac-C29*bLIS和pETDuet-tac-C29*bLIS-max。

4.一种包含权利要求2所述重组表达载体的工程菌，其特征在于，利用所述重组表达载体转化具有牻牛儿基二磷酸合成能力的大肠杆菌重组菌，得所述工程菌。