[发明专利]EBV病毒检测试剂盒

说明书

本发明涉及分子生物技术和基因检测领域，具体而言，涉及一种EBV病毒检测试剂盒，所述试剂盒包括a)引物对；b)上游探针、下游探针、发夹探针；以及c)两种纳米金探针。上述引物和探针能够实现在闭管条件下对EBV进行高灵敏、高分辨、低成本检测，能够有效的避免扩增产物的交叉污染。

技术领域

本发明涉及分子生物技术和基因检测领域，具体而言，涉及一种EBV病毒检测试剂盒。

背景技术

Epstein-Barr virus(EBV)病毒是一种嗜淋巴细胞的双链DNA病毒,属于疱疹病毒γ亚科，从1964年发现EBV至今,被证实的EBV感染所致疾病越来越多,在正常人群中EBV的感染率90％,且为终生携带。目前针对EBV的检测技术日趋成熟，常用的检测方法主要有培养、免疫检测、EBV DNA载量检测等，EBV感染者通常有外周血淋巴细胞升高和伴异型淋巴细胞以及转氨酶升高,但这对EBV感染诊断的帮助作用微乎其微。通过血清检测抗体能在一定程度上反映疾病的发展趋势,但不能呈现活动期病毒的具体数量。随着聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)技术的不断发展，荧光PCR技术逐渐广泛应用到EBV的检测中，通过EBV DNA载量检测，不仅可以评估鼻咽癌的发生风险，区分不明原因的感染，同时还可以对相关肿瘤的动态监测、预后评估也有积极意义。

发明内容

本发明通过一种可见光波长快速检测纳米金探针与模板杂交情况实现对EBV核酸的检出，为EBV检测提供一种更为简洁快速的方式。该试剂盒实施的过程对设施条件要求低、结果判读快速简单，且成本低廉。

具体的，本发明涉及一种EBV病毒检测试剂盒，其包括：

a)SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的引物对；

b)SEQ ID NO：3所示的上游探针、SEQ ID NO：4所示的下游探针、SEQ ID NO：5所示的发夹探针；以及

c)两种纳米金探针，其各自包含SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7所示核酸片段。

上述引物和探针能够实现在闭管条件下对EBV进行高灵敏、高分辨、低成本检测，能够有效的避免扩增产物的交叉污染。

根据本发明的再一方面，还涉及一种组合物，其由如上所述的EBV病毒检测试剂盒混合配制得到。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明一个实施例中有无修饰LNA纳米金探针杂交效率考察结果；

图2为本发明一个实施例中EBV核酸检测试剂的灵敏度实验结果；

图3为本发明一个实施例中EBV核酸检测试剂中干扰物质的影响的实验结果；

图4为本发明一个实施例中EBV核酸检测试剂的特异性验证结果；

图5为本发明一个实施例中EBV核酸检测试剂检测实际临床样本结果；

图6为本发明一个实施例中EBV实际临床样本的实时荧光PCR检测结果。

具体实施方式

现将详细地提供本发明实施方式的参考，其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上，对本领域技术人员而言，显而易见的是，可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如，作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中，来产生更进一步的实施方式。