[发明专利]一种快速定量水中大肠杆菌的方法

说明书

本发明公开了一种快速定量水中大肠杆菌的方法，通过紫外可见分光光度计分别测定不同浓度大肠杆菌在波长220、260、280、300、350、400、450、500、550nm处的吸光度，同时用显微计数法对大肠杆菌细胞进行精确计数，在吸光度和大肠杆菌浓度之间建立了良好的线性关系，根据所得到的校正曲线或回归方程快速定量待测样品中的大肠杆菌。本发明专利提供了一种快速定量水中大肠杆菌的方法，测量简便，无需试剂，快速准确，可用于较高浓度、大批量样品的测量。

技术领域

本发明涉及生物、医学与环保领域，更具体的说，是涉及一种快速定量水中大肠杆菌的方法。

背景技术

大肠杆菌是水中的常见病原菌，会造成传染性的肠道疾病，危害人们的身体健康。大肠杆菌是水质检测中的重要指标：《城镇污水处理厂污染物排放标准》(GB18918-2002)规定，污水处理厂出水中粪大肠杆菌要求低于10000个/L(一级A标)；《生活饮用水卫生标准》(GB5749-2006)规定，标准饮用水中总大肠杆菌群不得检出。另外，作为一种代表性的革兰氏阴性菌，大肠杆菌是科学研究中的典型微生物。因此，对水中大肠杆菌的快速定量检测尤为重要。

水体中细菌微生物现有的定量方法主要包括显微计数法、平板菌落计数法、发酵法、流式细胞仪计数法等。传统的显微计数法需要使用血球计数板或细菌计数板，检测随机性大、效率低、准确度不高；平板菌落计数法是最经典且常用的计数方法，但其耗时较长，在菌液浓度较大时需多次稀释(培养基菌落最佳计数范围为30-300个)，且只能对具有生长活性的细菌进行计数，误差较大，不便于大量样品的快速测定；发酵法需多次培养，步骤繁琐；流式细胞仪计数法虽快速准确，但需建立合适的方法才能准确测定，且价格昂贵，不便于普遍使用。

现有的测试方法较为繁琐，效率低，多适用于低浓度样品。本专利提供一种快速定量水中大肠杆菌的方法，测量简便，无需试剂，可用于较高浓度、大批量样品的快速测量。

发明内容

针对现有技术中大肠杆菌快速定量监测方法不足的技术现状，本发明提供一种更方便、简单、有效的快速定量水中大肠杆菌的方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的。

本发明快速定量水中大肠杆菌的方法，将含大肠杆菌的待测样品稀释一定倍数后，采用紫外可见分光光度计测定待测样品在特定波长处的吸光度，根据建立的吸光度和大肠杆菌浓度之间的校正曲线或回归方程，计算得到待测样品中大肠杆菌的浓度。

(1)建立校正曲线或回归方程

配制一组不同浓度的大肠杆菌菌悬液，通过紫外可见分光光度计分别在波长220、260、280、300、350、400、450、500、550nm处测定其吸光度A，同时，用显微计数法将对应的每个浓度的菌悬液样品进行细胞精确计数，得到单位体积菌悬液中大肠杆菌浓度C；分别测定空白样品在波长220、260、280、300、350、400、450、500、550nm处的吸光度A_I，根据吸光度A-A_I和大肠杆菌浓度C绘制校正曲线，或线性回归得到对应波长处的回归方程；

(2)计算大肠杆菌的浓度

稀释含大肠杆菌的待测样品，使稀释后菌悬液中的大肠杆菌浓度在回归方程或校正曲线的线性范围内，在与步骤(1)相同的条件下，采用紫外可见分光光度计测定220、260、280、300、350、400、450、500、550nm中任一波长处稀释后菌悬液的吸光度，根据对应的校正曲线或回归方程计算得到待测样品中的大肠杆菌浓度。

步骤(1)中所述校正曲线或回归方程的具体建立方法如下：