[发明专利]一种细胞无血清培养基添加物、培养基及用途

说明书

本发明公开了一种细胞无血清培养基添加物、培养基及用途，本发明的细胞无血清培养基添加物富含细胞因子、生长因子，替代了血清中含有的生长因子、贴壁因子等，实现了在未添加血清的情况下，保证间充质干细胞的正常生长。经实验证明能替代多种市售的间充质干细胞培养基，对间充质干细胞的培养有极佳表现效果。加入该添加物的培养基能使间充质干细胞在理想营养平衡状态下进行多代扩增而不发生分化(至少在10代以内)。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，尤其涉及一种细胞无血清培养基添加物、培养基及用途。

背景技术

目前干细胞的潜在市场商机庞大，干细胞研究将有不可估量的医学价值。干细胞的发现和干细胞技术的发展不仅为人类疾病的治疗提供了独特的视角、方法和手段，也为人类疾病治疗提供了新的希望和曙光。间充质干细胞是成体干细胞的一种，具有干细胞的共性和很强的自我增殖能力。间充质干细胞具有很好的分化潜能，可用于特定组织器官的损伤修复；能够参与构成支持造血的微环境，促进造血恢复，与造血干细胞共同移植能够降低GVHD的发生率；具有免疫调节和易化移植的作用，免疫原性低，用于人体安全可靠；因此，间充质干细胞在临床的应用研究也越来越受关注，在组织工程、细胞替代疗法和基因疗法等方面有着广阔的应用前景。

目前，间充质干细胞培养过程中一般使用胎牛血清，用量较大，细胞培养过程中的费用较高，胎牛血清组分复杂，有150多种已知组分，还有多种未知组分。另外，不同个体的血清，组分差别极大，这使得不同批号血清性能有差异，产品批次间稳定性较差，容易造成异种物质的免疫排斥问题。因此，急需一种无动物源、无血清的间充质干细胞培养添加物。

专利申请号为20181015233的发明专利公开一种CHO细胞无血清培养基的添加物，所述添加物为维生素B1、维生素B2、维生素B12、维生素C、维生素H、盐酸吡哆醇、盐酸吡哆醛、肌醇、叶酸中的任意一种或几种的混合物；该发明对无血清培养基中的重要添加物维生素进行研究，调控细胞生长代谢和产物表达，并针对不同细胞系及不同产品，调整培养基中营养成分及各个营养成分含量，从而提高细胞的存活率以及增殖等生理活动，调节细胞生长状态，进而提高产品产量，节约成本，获得较大经济效益，但是该专利并不是专门适用于间充质干细胞的培养。

发明内容

为了克服以上现有技术中存在的问题，提供一种细胞无血清培养基添加物，富含多种细胞因子、生长因子等，替代了血清中含有的生长因子、贴壁因子等，实现了在未添加血清的情况下，保证间充质干细胞的正常生长。

一种细胞无血清培养基添加物，所述添加物包含白蛋白、生长因子、葡萄糖、钠离子、甘油三酯、钙离子、镁离子、氯离子、磷酸根离子中一种或几种的混合物，所述白蛋白浓度为6-14㎎/ml、生长因子浓度为160-220ng/ml、葡萄糖2-4㎎/ml、钠离子0.1-0.2mol/L、甘油三酯0.5-2mg/ml、钙离子0.4-0.9mg/ml、镁离子15-25ug/ml、氯离子3-6mmol/L、磷酸根离子4-15mmol/L。

优选的是，所述添加物包含白蛋白、生长因子、葡萄糖、钠离子、甘油三酯、钙离子、镁离子、氯离子、磷酸根离子。

上述任一方案中优选的是，所述添加物由白蛋白、生长因子、葡萄糖、钠离子、甘油三酯、钙离子、镁离子、氯离子、磷酸根离子组成。

上述任一方案中优选的是，所述白蛋白浓度为6㎎/ml、生长因子浓度为160ng/ml、葡萄糖2㎎/ml、钠离子0.1mol/L、甘油三酯0.5mg/ml、钙离子0.4mg/ml、镁离子15ug/ml、氯离子3mmol/L、磷酸根离子4mmol/L。

上述任一方案中优选的是，所述白蛋白浓度为8㎎/ml、生长因子浓度为180ng/ml、葡萄糖2.5㎎/ml、钠离子0.12mol/L、甘油三酯0.8mg/ml、钙离子0.6mg/ml、镁离子20ug/ml、氯离子4.5mmol/L、磷酸根离子8mmol/L。