[发明专利]一种检测塞来昔布中芳胺类及芳香肼基因毒性杂质的方法

说明书

本发明公开了一种检测塞来昔布中苯胺、乙酰苯胺、对乙酰氨基苯磺酰胺、磺胺、对肼基苯磺酰胺盐酸盐和塞来昔布杂质F的LC‑MS/MS方法。所述方法的特征是采用反相C18柱作为固定相，流动相由A相和B相组成，流动相均由有机溶剂和缓冲盐的混合物配制而成，在液相色谱‑质谱联用仪系统中进行梯度洗脱。本发明提供的方法具有高效便捷、专属性好、灵敏度高等优点，可对塞来昔布中苯胺、乙酰苯胺、对乙酰氨基苯磺酰胺、磺胺、对肼基苯磺酰胺盐酸盐和塞来昔布杂质F残留进行快速准确的定性和定量分析，从而保证了塞来昔布的质量、提高临床用药的安全性。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种检测塞来昔布中苯胺、乙酰苯胺、对乙酰氨基苯磺酰胺、磺胺、对肼基苯磺酰胺盐酸盐和塞来昔布杂质F的LC-MS/MS方法。

背景技术

塞来昔布（Celecoxib），即4-[5-(4-甲基苯基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-1-基]苯磺酰胺，其分子式为C₁₇H₁₄F₃N₃O₂S，分子量为381.38，其结构式：

塞来昔布（Celecoxib）是美国西尔公司开发的第一个特异性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂，用于骨关节炎和类风湿性关节炎的治疗，是目前全球处方量最大的非甾体抗炎镇痛药。

在塞来昔布合成起始物料对氨基苯磺酰胺中，涉及多种具有警示结构的潜在基因毒性杂质。结合生产工艺，以及文献所述苯胺，乙酰氨基苯结构为警示结构，我们对其中涉及的含有警示结构的基因毒性杂质进行分析。

对氨基苯磺酰胺合成路线中涉及的基因毒性杂质有如下四个：苯胺、乙酰苯胺、对乙酰氨基苯磺酰胺、对氨基苯磺酸。在塞来昔布合成过程中，涉及到合成中间体对肼基苯磺酰胺和合成工艺杂质杂质F，需对其中对肼基苯磺酰胺和杂质F毒性杂质进行研究。

各基因毒杂质在塞来昔布合成工艺流程图中的分布见说明书附图1。苯胺、乙酰苯胺、对乙酰氨基苯磺酰胺、对氨基苯磺酸、对肼基苯磺酰胺盐酸盐和塞来昔布杂质F共六个基因毒杂质，可以按结构分为三类：苯胺类（苯胺和对氨基苯磺酸）、乙酰苯胺类（乙酰苯胺和对乙酰氨基苯磺酰胺）和苯肼类（对肼基苯磺酰胺盐酸盐、塞来昔布杂质F（对甲苯腙基苯磺酰胺））。塞来昔布最大日暴露量可达600mg，欧洲药物管理局发布了关于基因毒性杂质（GTI）的最大摄取量为1.5 μg/d，各基因毒性杂质TTC值按1.5 μg/d计算，总含量不得超过2.5ppm。

由于基因毒性杂质含量低，限度要求严格，故本研究采用HPLC-MS/MS法，对塞来昔布及其关键中间体物料中的潜在基因毒性杂质，进行专属和灵敏的检查。所以，本试验研究选择高灵敏度的液相色谱色谱分离-质谱检测的技术对塞来昔布中苯胺、乙酰苯胺、对乙酰氨基苯磺酰胺、磺胺、对肼基苯磺酰胺盐酸盐和塞来昔布杂质F进行直接限度检查，可以更好的控制塞来昔布原料药的质量，更好地对塞来昔布原料药中可能存在的苯胺、乙酰苯胺、对乙酰氨基苯磺酰胺、磺胺、对肼基苯磺酰胺盐酸盐和塞来昔布杂质F进行检测。

发明内容

本发明的目的是建立一个塞来昔布中苯胺、乙酰苯胺、对乙酰氨基苯磺酰胺、磺胺、对肼基苯磺酰胺盐酸盐和塞来昔布杂质F残留检测的LC-MS/MS方法，该方法为塞来昔布的潜在基因毒性杂质含量的测定提供了一种准确的、高效的检测方法。

为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种检测塞来昔布中苯胺、乙酰苯胺、对乙酰氨基苯磺酰胺、磺胺、对肼基苯磺酰胺盐酸盐和塞来昔布杂质F的LC-MS/MS方法，它包括如下步骤：

1、溶液配制

（1）卡马西平内标溶液的配制：称取卡马西平约10mg，精密称定，置100mL容量容量瓶中，以甲醇为溶剂溶解，并稀释至刻度，摇匀作为卡马西平储备液（100μg/mL），-20℃保存；