[发明专利]一种用于石蜡包埋组织分离检测细胞的方法

说明书

本发明实施例公开了一种用于石蜡包埋组织分离检测细胞的方法，其包括以下步骤：对同一病种多个相关病例的包埋蜡块组织进行HE染色及组织学观察，在每个所述HE切片上确认并标记目的细胞区；对比所述HE切片上标记的细胞区，准确标记定位所述包埋蜡块上相对应的目的细胞区位置，核对所有被标记的所述包埋蜡块。本发明实施例的方法用组织芯片法分离福尔马林固定石蜡包埋(Formalin fixed paraffin embedding，FFPE)的组织，操作相对简便，且后续DNA或RNA的提取易于操作，提取的RNA不易污染、降解，质量和浓度都较高，而且成本低。从细胞成分不同的组织切片中分离高度纯化的细胞群，解决了细胞异质性问题，从而提高了从FFPE的组织中提取DNA或RNA的质量。

技术领域

本发明实施例涉及生物检测技术领域，具体涉及一种用于石蜡包埋组织分离检测细胞的方法。

背景技术

分子检测技术是分子诊断的前提和基础，分子检测技术主要包括DNA测序、荧光原位杂交、实时定量PCR、片段分析等，这些检测技术主要围绕DNA、 RNA水平开展。新鲜冰冻组织的DNA、RNA保存较为完整，降解少，故从新鲜冰冻组织提取的DNA、RNA检测数据较为可信，因此目前常用新鲜冰冻组织开展研究，但新鲜冰冻组织保存成本高，组织收集困难，在一定程度上限制了其应用，但福尔马林固定石蜡包埋(Formalin fixed paraffin embedding，FFPE)的组织容易获得，且制作成本低廉、容易保存，但组织经福尔马林固定石蜡包埋后极易引起DNA、RNA降解，而且一张切片上除了肿瘤细胞还存在其他的坏死组织、结缔组织、免疫细胞、血管等，直接提取DNA或RNA 进行相关分子的检测十分不严谨。

激光捕获显微切割(Laser capture microdissection，LCM)是一种能够准确识别并从复杂的异构细胞群中分离同质细胞群的技术手法，ArcturusXT^TM系统LCM是现今世界上唯一将LCM和紫外、红外双激光融为一体的显微切割仪器。LCM已经被用于有效的分离各种类型细胞并获取DNA、RNA、蛋白质等。LCM适用组织类型与获取样本种类的多样性使其在科研中起到的作用越发关键。LCM最大优势为能准确分离纯化目的细胞，甚至可通过免疫组化或免疫荧光将特异性细胞标记，收集到的细胞成分能够达到绝对单一。但 LCM分离-RNA提取前进行的HE染色过程极易引起RNA降解，且应用的过程中，其成本较高。因此，如何精确的获取目的细胞变得尤为重要。

发明内容

为此，本发明实施例提供一种用于石蜡包埋组织分离检测细胞的方法，以解决现有技术中检测通量低，检测成本高以及无法获得过度纯化细胞以及提取的DNA或RNA的质量低的问题。

为了实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：

一种用于石蜡包埋组织分离检测细胞的方法，其包括以下步骤：

对同一病种多个相关病例的包埋蜡块组织进行HE染色及组织学观察，在每个所述HE切片上确认并标记目的细胞区；

对比所述HE切片上标记的细胞区，准确标记定位所述包埋蜡块上相对应的目的细胞区位置，核对所有被标记的所述包埋蜡块；

使用具有孔径的针，将多个所述相关病例的包埋蜡块的目的细胞区穿在同一蜡块的不同位置上，并在所述蜡块上做好标记，形成了组织芯片，并对其进行HE染色，显微镜下确定是否为目的细胞区域的组织芯片。

优选的，所述方法还包括：用所述组织芯片进行原位杂交、荧光原位杂交、原位PCR或原位RT-PCR。

优选的，所述针的直径为1mm。

优选的，所述HE切片标记的目的细胞区域的数量为1-4个。

优选的，所述方法还包括：

用所述组织芯片的蜡块提取目的细胞的RNA，以及通过mRNA反转录获得cDNA。