[发明专利]一种人胚肾细胞株在药物筛选中的应用

说明书

本发明公开了一种人胚肾细胞株在药物筛选中的应用，所述人胚肾细胞株用于神经病理疼痛和由高血压和中风引起的脑部缺血中的药物筛选，所述人胚肾细胞株为人胚肾细胞系HEK293T‑NMDAR‑α2δ1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：武汉大学保藏中心，保藏编号：CCTCC NO:C2019189，保藏日期：2019年09月05日。所述人胚肾细胞株能同时稳定表达CACNA2D1、GRIN1和GRIN2B三个基因，所述药物为对所述α2δ‑1‑NMDAR形成的电流有抑制作用的物质。本发明的筛选方法简单，采用α2δ‑1‑NMDAR复合物作为药物筛选的作用靶点，利用电流作为药物筛选的指标，为神经病理疼痛和脑部缺血的治疗提供了依据，促进了α2δ‑1‑NMDAR复合物在药物筛选中的广泛应用和研究。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，特别涉及一种人胚肾细胞株在药物筛选中的应用。

背景技术

α2δ是电压门控钙通道（VGCC）CaV1 和 CaV2（即L、P/Q、N和R型）的辅助亚基，该亚基（Cavα2δ）是由单一基因Cacna2d编码的，现已发现同源基因编码的α2δ亚基有四种亚型（α2δ-1~α2δ-4）。α2δ-1是最先被鉴定的，最初在骨骼肌中与钙通道复合物一起分离得到，随后的研究发现α2δ-1普遍存在于心脏和平滑肌以及中央和周边神经系统和分泌组织中，主要存在于兴奋性神经元的轴突末端。

大量研究一致表明周围神经损伤导致α2δ-1在感觉神经元中表达上调，并导致脊髓和背根神经节的α2δ-1向突触前末梢的转运增加；小鼠在无神经损伤的情况下α2δ-1过表达会表现出神经原性表型（触觉异常和痛觉过敏），这表明α2δ-1对背根神经元的兴奋性具有调节作用；与此一致， cacna2d1基因敲除小鼠在外周神经损伤后对机械刺激的敏感性降低，表现出神经源性机械超敏反应的迟发性发作等表型。

GRIN1和GRIN2B均为NMDAR受体基因，可分别编码NMDAR受体的GluN1和GluN2B亚甲基。α2δ-1通过其C末端与NMDAR的亚甲基（GluN1和GluN2B）相互作用形成异聚复合物（α2δ-1-NMDAR），促进了NMDAR的细胞表面转运和突触膜上的定位。在神经结扎的大鼠脊髓中α2δ-1表达增加，引发NMDA受体（NMDAR）的电流增加；Cacna2d1的过度表达增强了脊髓背角神经元的突触前和突触后NMDAR活性，导致疼痛过敏症。相反，Cacna2d1敲除或被干扰使神经损伤增加的突触NMDAR活性正常化。神经损伤使NMDAR在突触上的活性增强，而加巴喷丁或α2δ-1的C末端干扰肽使NMDAR在突触上的活性恢复正常。因此，α2δ-1是一种与NMDAR相互作用的蛋白，引发NMDAR的电流增加，提高了脊髓背角神经元的突触前和突触后NMDAR活性，可增加神经性疼痛中的NMDAR在突触的动态分布，导致疼痛过敏症。

α2δ-1-NMDAR复合物介入了多项病理机制，在神经性疼痛疾病中发挥了重要的作用，但目前，尚未有一种细胞株能够形成α2δ-1-NMDAR复合物，也尚未有以α2δ-1-NMDAR复合物为作用靶点的工具细胞用于药物筛选的研究，限制了α2δ-1-NMDAR复合物在药物筛选中的应用和研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种人胚肾细胞株在药物筛选中的应用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种人胚肾细胞株在药物筛选中的应用，所述人胚肾细胞株用于神经病理疼痛和脑部缺血中的药物筛选。

进一步，所述脑部缺血是由高血压和中风引起的。

进一步，所述人胚肾细胞株为人胚肾细胞系HEK293T-NMDAR-α2δ1，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址：武汉大学保藏中心，保藏编号：CCTCC NO:C2019189，保藏日期：2019年09月05日。