[发明专利]一种负载生长因子的复合缓释微粒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种负载生长因子的复合缓释微粒的制备方法，包括以下步骤：由胶原蛋白和壳聚糖组成胶原蛋白‑壳聚糖支架，由壳聚糖和弹性蛋白重组体组成包裹生长因子的微型胶囊，将所述微型胶囊嵌合在所述胶原蛋白‑壳聚糖支架上制备得到产品。本发明提供一种负载生长因子的复合缓释微粒的制备方法，首先制备得到具有三维折叠结构的胶原蛋白‑壳聚糖支架，该支架的孔隙中嵌合包裹生长因子的多层微型胶囊，对其中包裹的生长因子具有长时匀速的缓释作用，从而实现生长因子主动诱导缺损处组织修复。本发明还提供了一种负载生长因子的复合缓释微粒，具有良好的生物相容性、生物降解性和极低的免疫原性，使生长因子具有长时间，均匀的释放。

技术领域

本发明涉及一种复合缓释微粒，尤其涉及一种负载生长因子的复合缓释微粒及其制备方法。

背景技术

目前，富血小板血浆(Platelet-rich plasma，简称PRP)，是自体全血经离心后得到的血小板浓缩物，PRP中含有大量生长因子及蛋白质，广泛应用于临床：骨关节的修复、大面积烧伤皮肤的修复以及医美整形等领域中。

胶原蛋白是细胞外基质(ECM)的主要成份，属于结构蛋白质，约占哺乳动物蛋白质总质量的1/3，大量存在于皮肤、韧带、软骨、肌键等结缔组织或器官中。胶原具有良好的生物相容性，植入体内无毒副作用和刺激性，不易引起机体免疫反应，而且也有利于细胞的黏附、增殖和分化，加快创面愈合，并可降解而为新生组织提供足够的空间，广泛应用于生物材料的研究和开发利用中。但是单一材料存在着生物活性、强度等问题。

壳聚糖是一种天然碱性聚合电解质多糖，具有良好的生物相容性和抗菌活性，并且价格低廉。壳聚糖表面带有正电荷，能够吸附带负电的红细胞而诱导其聚集，进一步促进血小板凝血，因此被广泛应用于伤口止血和抗菌领域。

现有的负载生长因子的胶原蛋白-壳聚糖微粒作用于人体，被激活后1小时内达到90％的释放，在体外作用3天左右，在体内5天左右凋亡，作用时效短且集中，不利于持续调动和补充生长因子对创面进行修复。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种负载生长因子的复合缓释微粒的制备方法，制备工艺条件温和，原料易得。

本发明的目的之二在于提供一种负载生长因子的复合缓释微粒，具有良好的生物相容性、生物降解性和极低的免疫原性，对其中包裹的生长因子具有长时匀速的缓释作用，从而实现生长因子主动诱导缺损处组织修复。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种负载生长因子的复合缓释微粒的制备方法，包括以下步骤：由胶原蛋白和壳聚糖组成胶原蛋白-壳聚糖支架，由壳聚糖和弹性蛋白重组体组成包裹生长因子的微型胶囊，将所述微型胶囊嵌合在所述胶原蛋白-壳聚糖支架上制备得到产品。

进一步地，所述微型胶囊的制备过程如下：

(1)制备弹性蛋白重组体和壳聚糖的混合溶液：取弹性蛋白重组体和中分子量壳聚糖按1：1的比例进行混合，中分子量壳聚糖的分子量为300-400KDa，脱乙酰度75-85％，用氯化钠溶液溶解；

(2)制备包裹生长因子的碳酸钙微粒：在生长因子溶液中先加入碳酸钠溶液，再加入标记生长因子的荧光素，最后加入氯化钙溶液，搅拌后沉淀一段时间，去除上清液，洗涤后得到包裹生长因子的碳酸钙微粒；

(3)将上述步骤(2)的包裹生长因子的碳酸钙微粒浸入到上述步骤(1)的混合溶液中，重复进行浸泡、洗涤过程，采用悬浮沉淀法去除上清液，得到由弹性蛋白重组体和壳聚糖包裹生长因子的微型胶囊。

进一步地，所述胶原蛋白-壳聚糖支架的制备过程如下：将胶原蛋白和低分子量壳聚糖分别配置成溶液，混合后搅拌至溶液不透明，超声去除气泡，将混合溶液冷冻后冻干，将冻干后的固体放入交联剂中浸泡交联，洗去交联剂，冷冻后冻干，即得胶原蛋白-壳聚糖支架。