[发明专利]基于纳米孔测序平台的泌尿宏基因组样本建库和检测方法

权利要求书

1.一种基于纳米孔测序平台的泌尿宏基因组样本的建库方法，其特征在于，将待检测样本依次经去宿主和提取基因组后进行标记，得到的带标记模板再PCR扩增进行建库；

所述PCR扩增的反应体系中含有4％(v/v)的二甲基亚砜；

所述PCR扩增的反应程序促进高GC含量模板的解旋和延伸；

所述PCR扩增的反应体系中还包括带标记模板、扩增通用引物、DNA聚合酶和缓冲液；

所述DNA聚合酶为LongAmp Taq DNA聚合酶；

所述带标记模板的浓度为0.002-0.02ng/μl；

所述PCR扩增的反应程序包括：

2.根据权利要求1所述的建库方法，其特征在于，所述去宿主依次包括游离宿主DNA、降解宿主DNA和去除宿主DNA。

3.根据权利要求2所述的建库方法，其特征在于，所述游离宿主DNA包括待检测样本用0.1-0.5％(w/v)的皂苷处理5-15min。

4.根据权利要求2所述的建库方法，其特征在于，所述降解宿主DNA包括待检测样本经游离宿主DNA后，用0.3-1％(v/v)HL-SAN处理10-20min。

5.根据权利要求1所述的建库方法，其特征在于，所述标记包括将依次经去宿主和提取基因组后的待检测样本与FRM孵育反应。

6.根据权利要求5所述的建库方法，其特征在于，所述孵育反应的程序包括：先29-31℃反应0.5-1.5min，再79-81℃反应0.5-1.5min，最后11-13℃保存。

7.根据权利要求6所述的建库方法，其特征在于，所述孵育反应的程序包括：先30℃反应1min，再80℃反应1min，最后12℃保存。