[发明专利]用于荧光定量PCR检测ALDH2基因多态性的方法

说明书

本发明提供一种用于荧光定量PCR检测ALDH2基因多态性的引物探针组合，核苷酸序列如序列表所示；同时提供一种荧光定量PCR检测ALDH2基因多态性的方法。本发明采用实时荧光定量PCR Taqman‑MGB探针的方法检测ALDH2基因多态性，并且采用了野生型与突变型双探针的检测方法，不但提高了特异性，还降低了成本；Taqman‑MGB探针在实验结果的准确性、重复性、特异性、灵敏度等方面均优于普通的探针。因此，本发明建立的ALDH2基因多态性的方法存在结果准确、特异性灵敏度高、无毒害无污染、成本低廉、快速高效等优点。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，尤其是涉及用于荧光定量PCR检测ALDH2基因多态性的引物探针组合及检测方法。

背景技术

硝酸甘油(NTG)是硝酸酯类扩张血管药物的基础药物，临床上，硝酸甘油被广泛应用于治疗慢性心功能不全、室性心肌梗死、心绞痛及高血压等多种疾病与危象，是治疗心绞痛急性发作的经典治疗药物之一。然而，临床观察中发现，硝酸甘油并非对所有确诊存在冠脉狭窄的患者的心绞痛发作均有缓解作用，硝酸甘油的体内生物转化机制至今亦仍未被完全阐明。既往已有包括谷胱甘肽S-转移酶、细胞色素P450还原酶、细胞色素P450、旧黄酶、黄嘌呤氧化还原酶等在内的数种酶被提出，但自2002年Chen等报道了线粒体乙醛脱氢酶2(mtALDH2)在硝酸甘油生物活化中起着重要的作用且对ALDH2的抑制可能与硝酸甘油耐药有关之后，研究者们渐渐意识到ALDH2可能在硝酸甘油发挥疗效过程中起着决定性作用。

线粒体乙醛脱氢酶2(ALDH2)是参与乙醇、硝酸甘油等药物代谢的关键酶，ALDH2*2(Glu504Lys，rs671)多态性会导致所编码蛋白质的504位谷氨酸被赖氨酸所取代，从而影响ALDH2酶的活性。研究表明，携带突变等位基因(ALDH2*2)的个体ALDH2酶活性下降，杂合子个体酶活性仅为野生型个体的10％，突变纯合子个体酶活性缺失。经数据统计，亚洲人群中ALDH2*2等位基因的携带率为30-50％，携带ALDH2*2等位基因的个体酒精代谢能力下降，少量饮酒即出现脸红、心跳加速等不适；代谢硝酸甘油的能力下降，硝酸甘油抗心肌缺血的效应减弱，因此，携带ALDH2*2等位基因的心绞痛患者应尽可能改用其他急救药物，避免硝酸甘油含服无效。代谢酶活性：ALDH2*1/*1(GG)＞ALDH2*1/*2(GA)＞ALDH2*2/*2(AA)。

目前，对于ALDH2*2基因多态性检测的方法有很多种，如限制性长度多态性分析(RFLP)、直接测序法、印记杂交法、Taqman技术、等位基因特异性扩增法(ARMS)等。其中，最常用的测序法能够直接检测突变位点的位置和类型，但该方法操作步骤繁琐，检测周期长，且扩增产物容易产生污染。

发明内容

为了解决上述缺陷，本发明的技术目的是提供用于荧光定量PCR检测ALDH2基因多态性的引物探针组合及检测方法，该方法运用引物与双探针组合的检测方法，具有结果准确、特异性灵敏度高、无毒害无污染、成本低廉、快速高效等优点。

为了达到上述目的，本发明是通过如下技术方案实现的：一种用于荧光定量PCR检测ALDH2基因多态性的引物探针组合，所述引物探针的核苷酸序列：上游引物由SEQ IDNO.1所示，下游引物由SEQ ID NO.2所示，荧光探针1由SEQ ID NO.3所示，荧光探针2由SEQID NO.4所示。