[发明专利]用于荧光定量PCR检测CYP3A5基因多态性的方法

权利要求书

1.一种用于荧光定量PCR检测CYP3A5基因多态性的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针的核苷酸序列：上游引物由SEQ ID NO.1所示，下游引物由SEQ ID NO.2所示，荧光探针1由SEQ ID NO.3所示，荧光探针2由SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述CYP3A5基因多态性包括CYP3A5基因的CYP3A5*3位点。

3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合，其特征在于，所述荧光探针在5′末端区域标记有荧光基团，在3′末端区域标记有淬灭基团，荧光探针1和荧光探针2的荧光基团均不相同。

4.根据权利要求3所述的引物探针组合，其特征在于，所述荧光基团选自FAM、TET、VIC、ROX、Texas Red-X、Cy3、Cy5；淬灭基团选自TAMRA、BHQ、DABCYL、NFQ-MGB。

5.根据权利要求3或4所述的引物探针组合，其特征在于，所述荧光探针1的5′端标记有FAM的荧光基团，荧光探针2的5′端标记有VIC荧光基团，所有荧光探针的3′

端均标记有NFQ-MGB的淬灭基团。

6.权利要求1-5任一项所述的引物探针组合应用于制备荧光定量PCR检测CYP3A5基因多态性的试剂盒中。

7.一种用于荧光定量PCR检测CYP3A5基因多态性的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1-5任一项所述的引物探针组合。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，还包含DNA聚合酶、缓冲液、尿嘧啶DNA糖基酶、含dUTP的dNTPs和超纯水。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，还包含待测样品DNA提取试剂或DNA提取试剂盒。

10.一种用于荧光定量PCR检测CYP3A5基因多态性的检测方法，其特征在于，采用权利要求1-5任一项所述的引物探针组合对待测样品进行荧光定量PCR检测，包括步骤：

(1)从待测样品中提取基因组DNA，作为扩增模板；

(2)配制包含所述引物探针组合和所述扩增模板的荧光定量PCR反应体系，上游引物和下游引物的终浓度均为0.2-1.0μM；荧光探针的终浓度均为0.05-1.0μM；

(3)荧光PCR扩增反应，条件：90-98℃，预变性，5-20min；94-98℃变性10-50s；55-69℃，退火60-90s；68-72℃，延伸15-300s；30-50个循环；

(4)基因型判读：

方法一：扩增完成后，根据扩增曲线呈S型或类似S型，且Ct≤30，判断实验是否成功；再根据以下标准判断基因型：纯合型(突变、野生)：一条曲线Ct≤30，且曲线呈S型或类似S型；另外一条曲线Ct＞30，或无曲线产生；杂合型：两条曲线均Ct≤30，且曲线呈S型或类似S型；

方法二：扩增完成后，根据散点图自动读取基因型，每个点代表一个样品，每个数据集代表一种基因型：纯合野生型、杂合突变型、纯合突变型。