[发明专利]一种简单测定果汁中柠檬酸δ13

说明书

本发明涉及一种简单测定果汁中柠檬酸δ¹³C值的方法，其包括以下步骤：a.样品稀释：用纯净水将果汁样品稀释15～25倍，获得样品稀释液；b.蔗糖水解：向所述样品稀释液中加入酸，以使样品稀释液中存在的蔗糖完全水解，从而获得水解液；c.水解液稀释过滤：将水解液稀释，使得稀释后溶液中的柠檬酸浓度相对于果汁样品中的柠檬酸浓度被稀释150～250倍，然后过滤，得到滤液；d.用液相色谱‑稳定同位素比值质谱分析柠檬酸δ¹³C值，其中，所述液相色谱‑稳定同位素比值质谱中使用的色谱柱是氢离子交换液相色谱柱。本方法通过水解方法避免了蔗糖对柠檬酸测定的影响，操作简单，成本低，对柠檬酸δ¹³C的分析效率高，能够促进稳定同位素技术在果汁真伪鉴别，尤其是柠檬酸掺假检测中的应用。

技术领域

本发明涉及一种简单测定果汁中柠檬酸δ¹³C值的方法，具体而言，本发明涉及测定果汁中柠檬酸稳定碳同位素比值(记作δ¹³C)的方法，属于稳定同位素分析技术领域。

背景技术

果汁既具有水果的天然风味，又富含多种营养成分，因而深受广大消费者喜爱，但目前果汁的真伪鉴别问题，尤其是掺假检测是当前质量监督部门面临的难题。柠檬酸酸是各种水果中含有的一种重要的有机酸，果汁中的柠檬酸含量可以为鉴别掺假果汁提供重要依据。然而由于产地、品种、种类不同，水果中柠檬酸含量也是各不相同，而是存在一定的波动范围，并且当假冒伪劣产品中柠檬酸含量低于正常值时造假分子也可以通过添加柠檬酸进行调整，这就给果汁掺假鉴别带来了困难。稳定碳同位素技术在辨别不同来源的化合物方面具有重要作用(参见非专利文献1)，在检测果汁中外源添加的柠檬酸方面具有潜在应用价值，因此果汁中柠檬酸δ¹³C值的准确测定是当前研究的热点。根据稳定同位素比值质谱分析的要求，柠檬酸δ¹³C值测定过程中应排除其他有机物的干扰，而果汁是混合物，含有大量的糖类、有机酸等有机物，因此，柠檬酸的分离、纯化就成了δ¹³C测定的关键。

由非专利文献2-8可知，果汁中柠檬酸δ¹³C的测定经历了三个发展阶段：(1) Doner调整果汁酸度(至pH＝8.5)并加热至60℃，离心得到柠檬酸盐，清洗并干燥后用双路进样-稳定同位素比值质谱进行柠檬酸δ¹³C分析，但是这种技术不能将柠檬酸与其他有机酸完全分离，并且会含有部分糖类化合物；(2)Jamin先通过离子交换树脂分离糖类和有机酸，然后用制备型液相色谱分离苹果酸与柠檬酸后再用元素分析-稳定同位素比值质谱进行转化、分析；(3)随着技术的发展，液相色谱-稳定同位素比值质谱技术可以在线分析大分子有机物的碳同位素组成，但是该技术下液相色谱的流动相不能含有有机物质，因此虽然该技术配合某些亲水性色谱柱实现了醇类物质、糖类化合物、氨基酸δ¹³C的在线分析，但目前还未见有不经前处理而直接测定柠檬酸δ¹³C的报道：Guyon使用Alltech 700cH Carbohydratecolumn液相色谱柱建立了测定葡萄糖、果糖、甘油和乙醇δ¹³C的方法，但无论如何优化色谱条件，该体系下也不能准确测定柠檬酸，因此他们直接测定了柠檬汁中有机酸的平均δ¹³C值；祝伟霞尝试了离子交换柱的应用，但钙型离子交换柱不能有效分离柠檬酸与苹果酸，氢型离子交换柱能分开柠檬酸和苹果酸，但却存在蔗糖的影响，因此他们采用了制备液相配备钙型柱先行分离蔗糖与柠檬酸，收集馏分然后在配备氢型柱的液相色谱-稳定同位素比值质谱上测定的方式----虽然结果的稳定性良好，但却需要两台液相色谱仪同时工作，增加了分析成本，样品测定时间也很长。当前急需快速、经济的测定果汁中柠檬酸δ13C值的方法，本研究借鉴液相色谱仪-稳定同位素比值质谱仪的先进性、根据柠檬酸的分析要求以及蔗糖的理化特性，通过建立简单的前处理技术实现果汁柠檬酸δ¹³C值的快速准确测定，为果汁中柠檬酸的来源分析提供技术支持。

引用的非专利文献