[发明专利]冬虫夏草菌丝的发酵方法

权利要求书

1.冬虫夏草菌丝的发酵方法，其特征在于，其包括以下步骤：

步骤一、按重量份数计，取1～3份的蛋白胨、0.5～0.8份的葡萄籽粉、0.3～0.6份的洋葱粉、1～3份的蜂蜜、0.14～0.18份的硫酸镁和0.14～0.18份硫胺素依次加入至200～300份的去离子水中，充分搅拌30～40min，得混合液；

步骤二、在搅拌下向所述混合液中加入40～50份的食用菌菌糠，继续搅拌20～30min后，依次向所述混合液中加入1～3份的聚乳酸空心微球和1～3份的碳纳米管，然后升温至110～120℃继续搅拌2～3h，得发酵培养基，搅拌期间向其中通入无菌气体；

步骤三、将经过扩大培养的冬虫夏草液体菌种与步骤二得到的发酵培养基按照体积比为0.02:1的比例进行混合均匀，得第一发酵物，将所述第一发酵物置于发酵罐内，于18～20℃的温度下发酵，10～14h后过滤去除滤液，然后将所述发酵罐的内部压力调至0.8～1.2MPa，保压10～20min后，瞬时泄压，重复操作1～3次后，得第二发酵物；

步骤四、取1～3份的蜂蜜、0.14～0.18份的硫酸镁、0.14～0.18份硫胺素和8～9份的去离子水混合，并经过灭菌处理得补充液，将所述补充液加入至所述第二发酵物中，并于18～20℃的温度下发酵，12～14天后得发酵物料，从所述发酵物料中分离并收集冬虫夏草菌丝体。

2.如权利要求1所述的冬虫夏草菌丝的发酵方法，其特征在于，在步骤三之前，向所述发酵罐内通入无菌气体，将所述发酵罐内的空气完全置换为无菌气体；

步骤四中，在发酵的12～14天期间，每隔2天向所述发酵罐内通入无菌气体，通气时间为20～30min。

3.如权利要求2所述的冬虫夏草菌丝的发酵方法，其特征在于，步骤四中，所述补充液的加入具体为：将所述补充液从所述发酵罐的顶部加入至所述第二发酵物中，所述补充液加入的同时，将所述发酵罐的底部与抽吸泵连通，在抽吸泵的作用下，将所述补充液向下引流，当所述补充液渗透至所述第二发酵物的底部时，关闭抽吸泵。

4.如权利要求3所述的冬虫夏草菌丝的发酵方法，其特征在于，步骤四中，从所述发酵物料中分离并收集冬虫夏草菌丝体具体为：发酵12～14天后，从发酵罐内取出发酵物料，并向发酵物料中加入蒸馏水，使得水位高于发酵物料，将发酵物料与蒸馏水的混合物置于超声震荡下处理，30～40min后过滤收集滤渣，重复操作2～4次，得菌丝粗料，将所述菌丝粗料置于低温干燥箱内干燥至恒重，粉碎，过60～100目筛，即得冬虫夏草菌丝体。

5.如权利要求4所述的冬虫夏草菌丝的发酵方法，其特征在于，扩大培养的冬虫夏草液体菌种的培养方法为：将冬虫夏草的被毛孢菌种在无菌条件下接种至斜面培养基上，置于18~20℃的摇床上培养100~120h，得斜面母菌种；将斜面母菌种接种至锥形瓶内的液体培养基中，摇床培养100~120h后即得；

所述斜面培养基包括以下重量份数的原料：10～20份的玉米汁、15～25份的蜂蜜、1.2～ 2.4份的琼脂；斜面培养基的pH为6～6.7；

所述液体培养基包括以下重量份数的原料：1～3份的蜂蜜、0.14～0.18份的硫酸镁、0.14～0.18份的硫胺素、0.0007～0.002份的维生素B1和50～80份的水。

6.如权利要求5所述的冬虫夏草菌丝的发酵方法，其特征在于，所述食用菌菌糠经过了预处理，具体为：将食用菌菌糠置于温度为150～200℃、压力为5～8MPa的反应釜中，保压20～30min后瞬时泄压，食用菌菌糠从反应釜的喷管中喷出，即得。

7.如权利要求6所述的冬虫夏草菌丝的发酵方法，其特征在于，聚乳酸空心微球的粒径为20～30nm；碳纳米管的粒径为30～50nm。