[发明专利]制备抗体的方法在审
申请号: | 201911302717.0 | 申请日: | 2019-12-17 |
公开(公告)号: | CN110950952A | 公开(公告)日: | 2020-04-03 |
发明(设计)人: | 刘国良;唐爽;郭林峰;谢灿;冯艳;徐军;李晓平;陈小锋;李文佳 | 申请(专利权)人: | 东莞市东阳光生物药研发有限公司 |
主分类号: | C07K16/14 | 分类号: | C07K16/14;C07K16/06 |
代理公司: | 北京清亦华知识产权代理事务所(普通合伙) 11201 | 代理人: | 肖阳 |
地址: | 523871 广东省东莞市*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 制备 抗体 方法 | ||
1.被动免疫在制备抗体的用途。
2.一种制备抗体的方法,其特征在于,包括:
利用抗原对第一待免疫动物进行主动免疫,以便获得第一含有抗体的血清;
利用所述第一含有抗体的血清对第二待免疫动物进行被动免疫,以便获得第二含有抗体的血清;
将含有第二抗体的血清进行纯化处理,以便获得第二抗体。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,进一步包括将第一含有抗体的血清进行纯化处理,以便获得第一抗体;
将第一抗体与所述第二抗体混合,以便获得所述抗体。
4.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述抗原为细胞全蛋白HCPs,任选地,所述抗原为发酵工程菌HCPs,任选地,所述抗原为毕赤酵母HCPs,任选地,所述第一待免疫动物和/或第二待免疫动物为新西兰大白兔。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述发酵工程菌HCPs是通过如下方式获得的:
将携带空载体的发酵工程菌进行发酵处理,以便使发酵工程菌的OD600至少达到400,优选地,不超过600;
将发酵液作为免疫原1,将发酵液上清作为免疫原2,将发酵工程菌菌体作为免疫原3;
将发酵液进行亲和层析处理,层析处理液作为免疫原4。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,进一步包括分别将所述免疫原1、免疫原2、免疫原3以及免疫原4与弗氏完全佐剂等体积混合,以便获得免疫原混合液1、免疫原混合液2、免疫原混合液3以及免疫原混合液4。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,进一步包括分别将所述免疫原1、免疫原2、免疫原3以及免疫原4与弗氏不完全佐剂等体积混合,以便获得免疫原混合液A、免疫原混合液B、免疫原混合液C以及免疫原混合液D。
8.根据权利要求6或7所述的方法,其特征在于,所述主动免疫是通过如下方式进行的:
分别利用所述免疫原混合液1、免疫原混合液2、免疫原混合液3以及免疫原混合液4对所述第一待免疫动物的四个个体进行初始免疫;
每隔7~10天,分别利用所述免疫原混合液A、免疫原混合液B、免疫原混合液C以及免疫原混合液D对所述第一待免疫动物的四个个体进行加强免疫。
9.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,进行被动免疫前,进一步包括将所述第一含有抗体的血清进行稀释处理,任选地,所述稀释处理的倍数为2~4倍,优选地,3倍。
10.根据权利要求8所述的方法,其特征在于,将第一次和第二次加强免疫后所获得的血清合并后,以便获得被动免疫用血清A、被动免疫用血清B、被动免疫用血清C以及被动免疫用血清D。
11.根据权利要求9或10所述的方法,其特征在于,所述被动免疫是通过如下方式进行的:
分别利用被动免疫用血清A、被动免疫用血清B、被动免疫用血清C以及被动免疫用血清D对所述第二待免疫动物的四个个体进行初始免疫;
每隔7~10天,分别利用所述被动免疫用血清A、被动免疫用血清B、被动免疫用血清C以及被动免疫用血清D对所述第二待免疫动物的四个个体进行加强免疫。
12.根据权利要求2或3所述的方法,其特征在于,当血清中抗体滴度至少达到50万时,分别对第一含有抗体的血清和第二含有抗体的血清进行纯化处理;
优选地,血清中抗体滴度不超过400万。
13.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述抗原与所述第一待免疫动物个体的质量比1:1~3:2。
14.根据权利要求2所述的方法,其特征在于,所述第一含有抗体的血清与所述第二待免疫动物个体的体积质量比为1:20~1:90。
15.一种多克隆抗体,其特征在于,是通过权利要求2~14任一项所述的方法获得的。
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