[发明专利]基于双发射碳量子点标记核酸适配体的荧光比值法检测邻苯二甲酸二丁酯的方法

说明书

本发明公开了一种基于双发射碳量子点标记核酸适配体的荧光比值法检测邻苯二甲酸二丁酯的方法，本发明以双发射碳量子点作为标记物，结合特异性识别邻苯二甲酸二丁酯的氨基化核酸适配体，实现了对邻苯二甲酸二丁酯的灵敏检测；而且本发明检出限低，特异性好、荧光性能稳定，适用于食品中邻苯二甲酸二丁酯的超灵敏快速检测。

技术领域

本发明涉及邻苯二甲酸二丁酯的检测方法，特别是涉及一种基于双发射碳量子点标记核酸适配体的荧光比值法检测邻苯二甲酸二丁酯的方法，属于食品安全检测技术领域。

背景技术

邻苯二甲酸二丁酯是一类重要的化工增塑剂，普遍应用于塑料制品、化妆品及食品包装材料等材料中。增塑剂邻苯二甲酸二丁酯可以大大增加塑料的可塑性和提高塑料的强度，其含量有时可达产品的50％，因此邻苯二甲酸二丁酯在包装材料中无处不在，人类与其有大量接触。而邻苯二甲酸二丁酯被确认为第四类毒性化学物质，可通过呼吸道、消化道和皮肤等途径进入人体，且由于邻苯类增塑剂与塑料等材料仅为物理结合，很容易被油脂等溶出，造成污染并危害人类健康。邻苯二甲酸二丁酯可对人体生殖系统造成影响，并有致癌致畸致基因突变的严重危害，因此邻苯二甲酸酯类增塑剂禁止添加进任何食物、药品和保健品中。《食品容器、包装材料用添加剂使用卫生标准》(GB9685-2008)规定邻苯二甲酸二丁酯最大残留量分别为0.3mg/kg。

邻苯二甲酸二丁酯的普遍性和潜在毒性引起了极大的关注。目前对于邻苯二甲酸二丁酯的检测方法主要依赖于仪器分析，常见的方法有气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、高效液相色谱、高效液相色谱-质谱联用法、近红外光谱法等。其中色谱法和质谱法仪器价格及日常维护费用昂贵，故分析成本高，且分析时间一般较长；近红外光谱法检测邻苯二甲酸二丁酯灵敏度低、建模难度大。

核酸适配体能与目标物质高特异性、高选择性地结合，且可以很容易地修饰和固定，因此被广泛应用于各种分析工作中。核酸适配体应用于实际操作中常与荧光标记材料联用，从而达到灵敏、直观的检测目的，但是传统的有机荧光染料和荧光蛋白存在光稳定性较差、光漂白和毒性高等不足，难以用于长时间的荧光标记和跟踪。因此筛选一种灵敏、稳定、低毒的的荧光标记物，结合核酸适配体的特异性识别，建立一种高灵敏分析检测邻苯二甲酸二丁酯的方法具有重要意义。

发明内容

针对上述现有技术所存在的问题，本发明的目的是提供一种基于双发射碳量子点标记核酸适配体的荧光比值法检测邻苯二甲酸二丁酯的方法。本发明采用一锅溶剂热法制备出荧光性能稳定的羧基双发射碳量子点，结合特异性识别邻苯二甲酸二丁酯的氨基化核酸适配体，实现了对邻苯二甲酸二丁酯的灵敏检测；而且本发明特异性良好、实验操作简单，荧光性能稳定，适用于食品中邻苯二甲酸二丁酯的痕量检测。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种基于双发射碳量子点标记核酸适配体的荧光比值法检测邻苯二甲酸二丁酯的方法，包括以下步骤：

(1)将双发射碳量子点进行羧基活化处理，得到羧基活化的碳量子点；

(2)将羧基活化的碳量子点与氨基化的核酸适配体溶液混合后反应，得到碳量子点-核酸适配体偶联物；

(3)向碳量子点-核酸适配体偶联物中加入石墨烯分散液反应3-6min，然后加入待测溶液，30-40℃下反应1.5-3.5h；测定反应后的溶液在430nm和525nm处的荧光强度，从而实现对待测溶液中邻苯二甲酸二丁酯的检测。

优选的，步骤(1)中，所述双发射碳量子点由如下方法制备而成：

将抗坏血酸溶于醇-水二元体系中，剧烈搅拌，将搅拌后的溶液置于反应釜中150-200℃加热50-100min，冷却至室温，过滤除去团聚体，即制备得到双发射碳量子点。

更优选的，所述醇-水二元体系是由甲醇和水按体积比为13:7配制而成。