[发明专利]一种制备腺苷的工艺

说明书

本发明属于腺苷制备技术领域，公开了一种制备腺苷的工艺，其特征在于，所述工艺包括如下步骤：步骤1）发酵，步骤2）陶瓷膜过滤，步骤3）色谱分离，步骤4）脱色，步骤5）结晶，步骤6）烘干、粉碎。本发明分离提取工艺中采用了陶瓷膜过滤、顺序式模拟移动床色谱分离、纳滤膜脱色，实现腺苷与蛋白、杂酸、其他杂质之间的彻底分离，收率和纯度大大提高。

技术领域

本发明属于腺苷制备领域，具体涉及一种制备腺苷的工艺。

背景技术

腺苷，又称“腺嘌呤核苷”。腺苷是一种杂环分子，分子量为267.25，由腺嘌呤、核糖和三个磷酸基团连接而成，水解时释放出能量较多，是生物体内最直接的能量来源。人体肌肉中储藏多种能源物质，其中腺苷是主要成分，是人体循环系统疾病的药物。因为腺苷有促进冠状血管扩张及心肌代谢的机能，扩张血管，增加冠状血管血量的药理作用，因此可以用于冠状血管障、狭心症、动脉硬化症及高血压症等疾病的治疗。此外，腺苷及其衍生物可以作为抑制血液凝固药物使用，用腺苷来保藏血液效果很好。同时也可以用于食品、保健品添加剂，有很好的市场前景。

目前，现有技术用于生产腺苷的方法由酶法、化学法以及发酵法。酶法和化学法成本较高，发酵法具备成本低、副产物小，对环境更加友好。在工业上，主要以糖质原料发酵来进行腺苷的生产。文献1“有机氮源对腺苷发酵的影响，发酵科技通讯2014年”，主要研究了玉米浆、豆饼水解液和酵母粉等有机氮源对腺苷发酵产苷的影响,在5 L发酵罐上通过添加不同浓度的有机氮源，考察枯草杆菌XGL在不同条件下的菌体生长与产苷情况，通过实验优化，获得最佳的有机氮源为玉米浆20 mL/L、豆饼水解液30 mL／L、酵母粉16 g／L，在此条件下发酵50 h，比初始发酵条件提高65.1％。文献2“响应面设计法优化腺苷发酵培养基，华东理工大学学报2005年”对发酵培养基进行了优化，包括酵母粉、玉米浆、硫酸铵以及硫酸镁等组分，较优化之前提高了28.6%。文献3“腺苷发酵液中有机酸的代谢规律，华东理工大学学报2004年”通过增强TCA循环的手段来提高目的产物，采用了蔗糖+谷氨酸培养基来发酵产腺苷，提高腺苷产量，延长了发酵时间。但是，腺苷发酵产量仍有较大的提升空间。基于该技术问题，申请人就“一种发酵生产腺苷的方法”申请了专利技术，提高了腺苷的发酵产率。

发明内容

在申请人之前的专利技术“一种发酵生产腺苷的方法”的基础上，申请人继续对发酵液进行了提取，制备出了高纯度高收率的腺苷产品。

本发明是通过如下技术方案来实现的。

一种制备腺苷的工艺，其特征在于，所述工艺包括如下步骤：步骤1）发酵，步骤2）陶瓷膜过滤，步骤3）色谱分离，步骤4）脱色，步骤5）结晶，步骤6）烘干、粉碎。

具体地，所述工艺包括如下步骤：

步骤1）发酵：将产腺苷的枯草芽孢杆菌种子液接种到装有发酵培养基的发酵罐中，培养温度32-33℃，溶氧量为15-25%，通过自动流加氨水控制pH，0-24h，控制pH在6.8，24h至结束，控制pH为6.5；流加蔗糖溶液控制发酵液中残糖含量不低于1g/L；发酵总时间为48-60h，得到腺苷发酵液；其中，发酵至24h时，往发酵液中添加10-15%体积份的促进剂，所述促进剂包含丙氨酸和琥珀酸。

步骤2）陶瓷膜过滤：将腺苷发酵液加热至80℃打入提取罐，降温至35℃以后，用盐酸调节PH 4-4.5后，发酵液通过陶瓷膜过滤，去除截留物，得到过滤后的滤液；

步骤3）色谱分离：将得到的滤液打入顺序式模拟移动床色谱系统，进行腺苷与其他杂质的分离，得到腺苷提取液；

步骤4）脱色：将获得的腺苷提取液通过孔径为1-2nm的纳滤膜进行吸附脱色，温度为30-40℃，压力为10-20bar，得到脱色液；

步骤5）结晶：将脱色液打入双效蒸发器进行浓缩3-4倍后，导入结晶罐进行结晶，转速为20r/min，时间为15-20min，然后离心收集湿结晶；