[发明专利]热稳定性好的甘油-3-磷酸氧化酶及其在试剂盒中的应用

说明书

本发明公开一种热稳定性好的甘油‑3‑磷酸氧化酶，其氨基酸序列为SEQ ID.No.2中所示序列，编码所述的热稳定性好的甘油‑3‑磷酸氧化酶的多核苷酸序列为SEQ ID.No.1中所示序列；本发明获得的重组甘油‑3‑磷酸氧化酶具有热稳定性好的特点。60℃处理30min后，酶活保留率为52.3%；37℃处理3d后，酶活保留率为92.7%，本发明获得的重组甘油‑3‑磷酸氧化酶，热稳定性好，可以提高酶在试剂盒中的热稳定性，有利于改进试剂盒稳定性。同时，也可以减少该酶在甘油三脂中的用量，降低试剂盒生产成本。

技术领域

本发明涉及xx领域，具体讲是一种热稳定性好的甘油-3-磷酸氧化酶及其在试剂盒中的应用。

背景技术

该发明涉及的是诊断用酶技术领域，具体的说是涉及到热稳定性好的甘油-3-磷酸氧化酶的制备方法及其应用。

甘油三酯(TG)是脂质的组成成分，是甘油和3个脂肪酸所形成的脂。甘油三酯属中性脂肪，人体储存了大量甘油酯，其首要功能是为细胞代谢提供能量，血浆中的甘油酯90％～95％是甘油三酯。

甘油三酯在人体血脂检测与监控中具有重要的临床意义。依据2007年《中国成人血脂异常防治指南》地划分标准，空腹(禁食12小时)甘油三酯≤1.70Mmol为适当水平；1.70～2.25Mmol为边缘升高；≥2.26Mmol为升高。甘油三酯升高可见于各种高脂蛋白血症、糖尿病、痛风、梗阻性黄疸、甲状腺功能低下、胰腺炎等疾病。现在临床普遍认为甘油三酯升高是冠心病发病的一个危险因素，当其升高时也应该给予饮食控制或药物治疗。

临床上检测TG的化学法由于特异性差已被淘汰。目前甘油三酯检测主要为由酶法代替。酶法快速准确，操作简单，并能在自动生化分析仪上进行大批量标本检测。酶法检测TG的反应原理为：待检测的TG在脂蛋白脂酶(Lipoprotein Lipase，LPL)的作用下，分解成脂肪酸和甘油；甘油在甘油激酶(Glycerol kinase，GK)的作用下，与试剂盒中ATP进行磷酸化反应，生产甘油-3-磷酸，甘油-3-磷酸在甘油-3-磷酸氧化酶(Glycerol-3-phosphateOxidase，GPO)的作用下进一步反应，被氧气氧化，生成产物过氧化氢(H2O2)，后者利用Trinder反应即过氧化物酶(Peroxidase，POD)，显色剂4-氨基安替比林(4-AAP)存在下和色原物质生成有色的醌亚胺化合物，通过在可见光下的吸收峰变化测定TG的含量。

具体反应步骤分为以下四个部分：

GPO在酶法测定TG方法中，具有重要的作用。其催化的甘油-3-磷酸氧化生成H₂O₂，往往是试剂盒反应的限速步骤，该酶的用量、酶活力在很大程度上决定了酶法测定的灵敏度和精密度，该酶的热稳定性同样很大程度确定了试剂盒的储存稳定性。然而目前市场上已有的GPO热稳定性差，难以满足检测试剂盒在运输和临床应用过程中温度的影响，从而导致试剂盒临床检测时的灵敏度和精密度的下降，导致试剂盒应用受限。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，克服上述现有技术的不足，提供一种热稳定性好的甘油-3-磷酸氧化酶(GPO)的制备方法，并提供其在甘油三酯检测试剂盒中的应用。