[发明专利]一种鳞状细胞癌抗原的结合蛋白

说明书

本发明涉及一种鳞状细胞癌抗原的分离的结合蛋白，其包含鳞状细胞癌抗原结合结构域，所述结合蛋白活性强，与鳞状细胞癌抗原具有很高的亲和力，能够有效用于鳞状细胞癌抗原的检测。

技术领域

本发明涉及免疫技术领域，具体而言，涉及一种鳞状细胞癌抗原的分离的结合蛋白。

背景技术

鳞状细胞癌(squamous cell carcinoma)常发生在身体原有鳞状上皮覆盖的部位，如皮肤、口腔、唇、子宫颈、阴道、食管、喉、阴茎等处，也可发生在有鳞状上皮化生的其他非鳞状上皮覆盖部位，如支气管、胆囊、肾盂等处。肉眼观察，鳞状细胞癌多呈菜花状。此类肿瘤恶性程度较基底细胞深，发展快，破坏大，既可破坏眼部组织，侵入副鼻窦或颅内，又可以通过淋巴管转移至耳前或颌下淋巴结，甚至引起全身性转移。

鳞状细胞癌相关抗原(squamous cell carcinoma antigen，SCCA)是一种特异性好且最早用于诊断和监测鳞状上皮细胞癌的肿瘤标志物。SCCA是肿瘤相关抗原TA-4(TumorAssociated-Antigen 4)的亚片段，由10个以上的蛋白组成，分子量约为45KD，等电点为5.9-6.6。根据其等电点可以分为两类：酸性SCCA和中性SCCA，中性SCCA一般在鳞状细胞内部，酸性SCCA则大量表达于鳞状细胞癌并外泌出细胞。目前，两个属酸性SCCA的蛋白：SCCA-1和SCCA-2的基因已鉴别得到，其中SCCA-1抑制糜蛋白酶和组织蛋白酶L的活性，发挥抗凋亡效应；SCCA-2能够抑制组织蛋白酶G和巨细胞糜酶的活性，因而使得上皮细胞免受这些蛋白酶所导致的炎症损伤。出现在病人血清中的SCCA抗原可能是因为肿瘤细胞核的正常更新引起SCCA过渡生产的作用。

在癌症患者体内，鳞状细胞癌的癌细胞释放SCCA增多，故SCCA的血清水平检测常应用于多种器官鳞状细胞癌包括宫颈癌、头颈癌、食道癌、肺癌和气管癌、泌尿生殖道和肛管部位的鳞状上皮细胞癌的诊断、预后、病情监测、疗效评价等。有研究表明，有28％～88％的宫颈鳞状上皮细胞癌患者的血清SCCA水平升高。经过治愈的癌症患者中，46％～92％的患者在复发之前2～8个月，即可检测到SCCA的水平升高,这些研究表明对癌症的检测及对其预后可以进行正确评估。

目前，临床上对于鳞状细胞癌的辅助诊断大多是通过测定血清中鳞状细胞癌抗原(SCCA)的浓度，同时对于癌症患者，可通过对于血清SCCA浓度的动态监测，来辅助判断疾病进程、治疗效果和复发。相关的检测手段包括酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光分析法、胶体金分析法等等，均涉及针对SCCA的特异性单克隆抗体的使用。

单克隆抗体多为通过杂交瘤细胞生产，特异性强，但单克隆抗体在制备过程中，成本较高，且容易丢失表位，同时由于从小鼠腹腔产生，受小鼠个体影响大，不同批次间的产品差异较大，另外现有的抗SCCA抗体亲和力和活性都不够理想，无法满足临床检测的要求。因此，本领域对于成本低、活性强、亲和力高、稳定性高的检测用抗体存在着强烈地需求。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明涉及一种新颖的鳞状细胞癌抗原的分离的结合蛋白，其包含鳞状细胞癌抗原结合结构域，并对该结合蛋白的制备、应用等方面进行研究。

其中所述抗原结合结构域包含选自下述氨基酸序列的至少一个互补决定区：或；与下述氨基酸序列的互补决定区具有至少80％的序列同一性且与SCCA具有K_D≤8.65×10^-9mol/L的亲和力；

互补决定区CDR-VH1为G-F-X1-F-T-D-X2-Y-M-X3，其中，

X1是S或T，X2是Q、N或H，X3是T或S；

互补决定区CDR-VH2为L-X1-R-N-K-X2-N-G-Y-T-T-X3-Y-S-A-S-X4-K-G，其中，