[发明专利]基于液基细胞制片的单细胞制片方法

权利要求书

1.基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：液基样本处理：将预处理后的液基样本逐个放入处理器皿中，对液基样本分别进行37℃孵育，反应体系切换，冲洗红细胞去除，换PBS缓冲液，加入磁珠去除白细胞干扰等处理；

步骤2：加入细胞保存处理液；将液基标本加入到细胞保存处理液中，充分震荡；

步骤3：沉淀：处理后的液基样本倒入沉降仓，静置沉降，吸去上清；

步骤4：巴氏染色：液基样本静置沉降，吸去上清后置入无水乙醇或异丙醇，置入PH7.8tris缓冲液，置入苏木素染液，置入PH7.8tris缓冲液，置入无水乙醇或异丙醇，置入EA-OG混合染液，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置于二甲苯；

步骤5：离心制片，将巴氏染色后的液基样本转移出沉降仓，进入离心机的制片仓，自动启动离心机，使制片仓中的细胞通过离心重力的作用，比重较大的阳性细胞优先沉淀到病理玻片上，形成均匀的细胞层。

2.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤1中，预处理包括液基样本整理、摆放、扫码。

3.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤1中，37℃孵育的时间为8-12min，反应体系切换为生理盐水体系。

4.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤1中，冲洗红细胞去除采用的冲洗液为生理盐水，冲洗时间为3-5min。

5.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤2中，细胞保存处理液由如下重量份的原料组成：乙醇35份、柠檬酸钠3份、氯化钠5份、N-乙酰半胱氨酸7份、二硫代苏糖醇6份、脯氨酸3份。

6.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤2中，液基标本与细胞保存处理液加入的体积比为一比三。

7.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤3中，静置时间为3小时。

8.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤4中，置入无水乙醇或异丙醇10-12秒，置入PH7.8tris缓冲液5-8秒，置入苏木素染液3-6分钟，置入PH7.8tris缓冲液0.8-1.2分钟，置入无水乙醇或异丙醇，重复2遍，置入EA-OG混合染液2-4分钟，置入无水乙醇或异丙醇9-12秒，重复2遍，置于二甲苯8-12秒，重复2遍。

9.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤5中，离心机进行制片时，离心速度为800r/min，离心时间为6min。

10.根据权利要求1所述的基于液基细胞制片的单细胞制片方法，其特征在于：所述在步骤5中，封片采用的封片试剂为紫外光固化胶。