[发明专利]一种获得高硬脂酸油菜的方法

说明书

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一种利用基因编辑技术获得高硬脂酸油菜的方法。所述方法包括以下步骤：S1，根据甘蓝型油菜BnSAD1.A3和BnSAD1.C3基因的核苷酸序列设计并筛选五个碱基位点的靶点序列，并针对靶点序列设计引物；S2，构建五靶点基因编辑载体pBnSAD1载体；S3，pBnSAD1载体用受体材料甘蓝型油菜下胚轴遗传转化，获得高硬脂酸油菜。本发明所提供的方法可以不同程度的提高油菜硬脂酸的含量，为甘蓝型油菜高硬脂酸育种提供了新的途径，提供了新的种质资源，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体涉及一种利用基因编辑技术获得高硬脂酸油菜的方法。

背景技术

油菜是我国重要的油料作物和食用植物油来源。油菜的脂肪酸改良主要是从不同的用途展开，其中最受关注的是提高油菜油酸含量，改善菜籽油的品质。但是对于油菜中硬脂酸含量的遗传改良研究很少有报道。高硬脂酸(C18∶0)和油酸(C18∶1)含量的植物油是目前工业上的一大需求，可用于烘焙食品，与目前市场上的人造黄油相比更有利于人类的健康。为了获得高硬脂酸的植物油，研究者们已经在向日葵、大豆和拟南芥中获得高硬脂酸(C18∶0)的突变体，均能显著提高硬脂酸含量。到目前为止，尚未有通过对甘蓝型油菜硬酯酰基去饱和酶(S-ACP-D)基因进行突变获得高硬脂酸(C18∶0)的突变体的报道。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的技术问题，提供一种获得高硬脂酸油菜的方法，该高硬脂酸油菜是通过基因编辑手段获得。

本发明通过以下技术方案来实现上述技术目的：

本发明所提供的获得高硬脂酸油菜的方法，包括以下步骤：

S1，根据甘蓝型油菜BnSAD1.A3和BnSAD1.C3基因的核苷酸序列设计并筛选五个碱基位点的靶点序列，并针对靶点序列设计引物；

S2，构建五靶点基因编辑载体pBnSAD1载体；

S3，pBnSAD1载体用受体材料甘蓝型油菜下胚轴遗传转化，获得高硬脂酸油菜。

其中，所述五个碱基位点的靶点序列(5＇-3＇)分别见SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8。

其中，所述靶点序列的引物序列分别见SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ IDNO：137、SEQ ID NO：18。

其中，所述BnSAD1.A3拷贝的碱基序列如SEQ ID NO：2所示；所述BnSAD1.C3拷贝的碱基序列如SEQ ID NO：3所示。

本发明步骤S2中构建五靶点基因编辑载体pBnSAD1载体的步骤包括：

e、靶点接头制备；

f、靶点接头引物与sgRNA表达盒的连接和扩增；

g、靶标sgRNA表达盒与pYLCRISPR/Cas9载体的连接；

h、转化大肠杆菌，挑选阳性克隆，测序验证，得到最终载体；

e、将连接成功的载体转入农杆菌GV3101感受态细胞，得到pBnSAD1载体农杆菌菌株。

其中，所述BnSAD1.A3和BnSAD1.C3基因是根据拟南芥fab2基因进行基因家族分析得到的。

本发明还提供了上述利用基因编辑技术获得高硬脂酸油菜的方法在油菜育种中的应用。

本发明具有以下有益技术效果：