[发明专利]VIPR1基因与公鸡体质量和屠宰性状相关性的检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种基于VIPR‑1基因C1853921T位点与公鸡体质量和屠宰性状相关性的检测方法及应用。本发明以VIPR‑1基因C1853921T位点为候选标记检测该位点在地方鸡公鸡中的多态性并分析其与不同周龄体质量与屠宰性状的关系，以便为地方鸡种公鸡选育及标记辅助选择提供依据。这种选育方法相较于现在的屠宰选育，不仅成本低、操作简便，并且结果准确。本方法简单易行，可重复性强，在普通实验室即可进行。

技术领域

本发明涉及生物基因领域和动物学领域，尤其涉及一种基于VIPR1基因C1853921T位点与公鸡体质量和屠宰性状相关性的检测方法及应用。

背景技术

家禽繁殖内分泌调控机制和血管活性肠肽I型受体(vasoactive intestinalpeptide receptor 1，VIPR1)基因的体内体外表达实验以及VIPR1基因多态性与繁殖性状相关证明，VIPR1基因参与了繁殖行为的调控(Kansaku等，2001；You等，2001；Zhou等，2008；周敏等，2008；周敏等，2011)。禽类VIPR-1多态性及其多态性与母禽繁殖性能的相关性已有大量研究。申请者曾以鸡VIPR1基因作为体质量的候选基因，选取了12个多态位点对586只宁都黄母鸡进行基因型检测并分析与77日龄、84日龄、91日龄体质量的相关性，发现C1853921T位点仅与84日龄体质量显著相关(P0.05)。但该位点是否与公禽体质量、屠宰性状有关，还未见有报道。本专利以VIPR-1基因C1853921T位点为候选标记检测该位点在地方鸡公鸡中的多态性并分析其与不同周龄体质量与屠宰性状的关系，以便为地方鸡种公鸡选育及标记辅助选择提供依据。

发明内容

为了克服上述缺陷，本发明提供一种利用检测鸡VIPR1基因内含C1853921T位点的多态性与不同周龄公鸡体质量与屠宰性状相关性的关系，并利用这种关系和方法作为地方鸡种公鸡选育和标记的手段。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：一种基于VIPR1基因C1853921T位点与公鸡体质量和屠宰性状相关性的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待检测鸡种的基因组DNA；

(2)采用PCR反应扩增VIPR1基因C1853921T位点上下游203bp片段；

(3)将得到的PCR产物使用RFLP分型；

(4)采用SAS 9.0GLM程序进行统计分析VIPR1基因位点C1853921T不同基因型与公鸡体质量和屠宰性状的相关性。

步骤(1)，在翅下静脉采血1～2mL，用2％EDTA抗凝，-20℃保存备用。所采血样用常规的酚/氯仿抽提法提取基因组DNA，并稀释成100ng/μL备用。

步骤(2)从NCBI上下载鸡VIPR1基因组序列(GenBank登录号：NM_0010975230)，应用Genetool软件设计上下游引物，引物序列：F:5’-agaggaacgcagccagtg-3’，R:5’-cccacctaacataaaagctcaac-3’，扩增VIPR-1基因C1853921T位点上下游203bp片段。引物由湖南擎科生物有限公司合成。

步骤(3)，检测后的PCR产物使用RFLP分型。酶切反应体系为：PCR产物6.5μL，内切酶BsuR I 0.3μL，10×buffer缓冲液1.0μL，ddH₂O 2.2μL，37℃恒温箱放置过夜。2％琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物。凝胶成像系统拍照，根据带型判定基因型。

步骤(4)中采用SAS 9.0GLM程序进行统计分析，构建模型如下：Yij＝μ+Gi+eij。其中Yij为性状表型值，μ为该性状的总体均值，Gi为基因型效应值，eij为随机残差效应。

VIPR1基因C1853921T位点在检测公鸡体质量和屠宰性状相关性中的应用。