[发明专利]一种绿僵菌高孢粉的制备方法

说明书

本发明公开了一种绿僵菌高孢粉的制备方法，包括以下步骤：在试管中进行绿僵菌菌种斜面培养基的制作，并利用斜面培养基对绿僵菌菌种进行传代培养、活化；在试管中斜面培养基表面长满孢子时，从斜面培养基中取部分孢子及菌苔，将孢子及菌苔接入液体培养基中；将载有孢子及菌苔的液体培养基在恒温振荡箱中恒温培养，至液体培养液中出现粘稠菌丝体；将出现粘稠菌丝体的液体培养液与营养液混合，得混合的绿僵菌培养液，将培养液均匀喷洒在平铺的布块上，布块经蒸汽高温灭菌，且置于发酵容器进行发酵。该绿僵菌高孢粉的制备方法，利用布块作为培养载体能够降低培养成本，同时便于后期孢子的收集，土霉素的加入能够保证绿僵菌的生长环境。

技术领域

本发明属于生物发酵技术领域，具体涉及一种绿僵菌高孢粉的制备方法。

背景技术

20世纪中期以来，由于化学杀虫剂无限制地使用，严重污染了环境和农林牧产品，危害了人畜健康，同时使自然生态系统遭到破坏。生物防治日益被人们所重视，利用昆虫病原微生物防治害虫是生物防治的重要手段之一。真菌杀虫剂由于具有良好的扩散效果、较长的宿存能力、独特的体壁入侵方式，以及对害虫不产生抗药性和易大量生产等特点，使得真菌杀虫剂在森林害虫、土壤害虫和刺吸式口器害虫的生物防治中具有明显的优势。绿僵菌是最早应用于害虫生物防治的一种虫生真菌，能寄生8个目30个科昆虫超过200余种昆虫，利用绿僵菌防治害虫的研究与实践已逾百年，其具有致病力强、不污染环境、持效期长等特点，是一种可持续防治害虫的优良生物制剂。

目前，国内外绿僵菌分生孢子的获得主要是采用液固双相发酵的方式，即将液体种子接种于常规的大米等营养基质固体剂型固体发酵，但大米等基质的使用成本较高，同时后期不易分离。

发明内容

本发明的目的是提供一种绿僵菌高孢粉的制备方法，以弥补现有技术的不足。

为解决上述问题，本发明采用的技术方案为：一种绿僵菌高孢粉的制备方法，包括以下步骤：

S1、在试管中进行绿僵菌菌种斜面培养基的制作，并利用斜面培养基对绿僵菌菌种进行传代培养、活化；

S2、在试管中斜面培养基表面长满孢子时，从斜面培养基中取部分孢子及菌苔，将孢子及菌苔接入液体培养基中，液体培养基经蒸汽高温灭菌且保持室温；

S3、将载有孢子及菌苔的液体培养基在恒温振荡箱中恒温培养，至液体培养液中出现粘稠菌丝体；

S4、将出现粘稠菌丝体的液体培养液与营养液混合，得混合的绿僵菌培养液，营养液经蒸汽高温灭菌并冷却至室温，将培养液均匀喷洒在平铺的布块上，布块经蒸汽高温灭菌，且置于发酵容器进行发酵。

优选的，步骤S1中绿僵菌菌种培养温度保持为23-28℃。

优选的，步骤S3中保持恒温26℃，且恒温培养时间为2-3天。

优选的，步骤S4中保持发酵温度为25-28℃，发酵时间为4-6天。

优选的，斜面培养基按重量份计包括以下原料：稻壳粉100-200份，麸皮120-160份，土霉素0.1-1份，琼脂10-20份，水400-460份。

优选的，斜面培养基按重量份计包括以下原料：稻壳粉150份，麸皮140份，土霉素0.6份，琼脂15份，水430份。

优选的，斜面培养基的制备包括以下步骤：

稻壳粉与麸皮粉碎至200目，后进行高温灭菌混合，降温后加水混合，并混入琼脂及土霉素，混合均匀后得到斜面培养基。

优选的，营养液按重量份计包括以下原料：水1000份，蛋白粉20份，米粉20份，蔗糖40份，KH₂PO₄4×10^-5份。