[发明专利]一种Atg12基因敲除细胞系构建方法及其应用有效
| 申请号： | 201911314261.X | 申请日： | 2019-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN111041027B | 公开（公告）日： | 2022-10-28 |
| 发明（设计）人： | 李娟;白银山;孙铭飞;廖申权;戚南山;吴彩艳;吕敏娜;林栩慧;蔡海明;胡俊菁;于林增;肖文婉 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院动物卫生研究所 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N15/90;C12N9/22;C12N5/10 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 郑莹 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 atg12 基因 细胞系 构建 方法 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种敲除Atg12基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）合成SgRNA靶序列，所述SgRNA的靶序列的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；
2）将步骤1）合成的SgRNA靶序列与酶切过的LentiCRISPR-V2载体连接、转化成LentiCRISPRV2-Atg12慢病毒载体；
3）将步骤2）构建的LentiCRISPRV2-Atg12慢病毒载体与包装载体共转染到293FT细胞，生产慢病毒，将慢病毒侵染到HCT8人结肠细胞系，敲除Atg12基因；
用于合成步骤1）所述SgRNA靶序列的引物核苷酸序列如SEQ ID NO：3~4所示；
步骤3）所述LentiCRISPRV2-Atg12慢病毒载体、pMD2.G和psPAX2包装载体质量比为10～11：3.5～4.5：10～11，混合后转染293FT细胞。
2.权利要求1所述方法在构建Atg12基因敲除的HCT8人结肠癌细胞系中的应用。
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