[发明专利]一种基于RNA恒温扩增-金探针层析技术检测淋病奈瑟菌核酸的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种基于RNA恒温扩增-金探针层析技术检测淋病奈瑟菌核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

1)扩增反应液：含40mM pH 8.0的Tris-HCl，12mM MgCl₂，70mM KCl，15％DMSO，5mM DTT，每种dNTP各1mM，每种NTP各2mM，扩增引物各0.2μM，扩增中需要两对引物：淋病奈瑟菌扩增引物、内质控18S引物；

(1)淋病奈瑟菌扩增引物：

NG-R引物(5’-3’)：TAATCTGACTCACTAACGGGAGACTCAGACTGCGGACTGATCG；

NG-F引物(5’-3’)：TTGGTCGACGTACAAACTAGC；

(2)内参基因的扩增引物：

内参-R引物(5’-3’)：

TAATACGACTCACTATAGGGAGACACAGTTATCCAAGTAGGAG；

内参-F引物(5’-3’)：TCCTGCCAGTAGCATATGCT；

2)扩增酶：包含三种，逆转录酶、T7 RNA聚合酶和RnaseH；

3)核酸提取试剂：细胞裂解液；

4)检测液：包含金探针，为胶体金颗粒标记的核酸探针、每个指标的特异探针、C线显色探针，每个指标特异探针有两种，分别为CES系列和LES系列，其中CES系列和LES系列又可以设计多条，具体如下：

(1)淋病奈瑟菌特异探针(5’-3’)：

NG-CES1：TACGTCTTGAGAGGGAAttttGCTCGACTTGCCACCGAATA；

NG-LES1：TCGGGCCAAGTGCAATCCttttGCCTCAAAGACGGACGCCTTC T；

NG-LES2：ATCAATGCCTACGATATTttttGCCTCAAAGACGGACGCCTTC T；

(2)内参特异探针(5’-3’)

内参CES1：TTGGCTGAAGAATCCAACttttATCTGTATAGTGTCTGT；

内参CES2：TTGACATGGAGCCTGCGGttttATCTGTATAGTGTCTGT；

内参LES1：CTTAATTTGACTCAACACttttCGCAGTGCTCGAGCTCTGAG C；

内参LES2：CCTAGAAGCACGTCGTTCGttttCGCAGTGCTCGAGCTCTGA G；

内参LES3：AATACAGGACTCTTTCttttCCGCAGTGCTCGAGCTCTGAGC；(3)C线显色探针(5’-3’)

TCAGATCACTATGTACttttCGCAGTGCTCGAGCTCTGAGC；

(4)金探针

金探针5’端被巯基化修饰，所述序列为：

5’-CCTACTCTGCAGTGCTCCATCGTACGTCTGTCATTTTTGCTCAGAGC TCGAGCACTGCG-3’

5)试纸条：所用试纸条被固定于PVC底板上，从左往右依次是样品垫、NC膜、吸水纸；NC膜上有质控线C线和两条检测线T线，从样品垫到吸水纸方向分别为NG-T、内参-T和C线；NG-T处包被NG包被探针、内参-T处包被内参包被探针、C线处包被C线包被探针，具体序列(5’-3’)为：

NG包被探针：ACACCAGCTATAGATAttttACACCAGCTATAGATA；

内参包被探针：CAGACACTATACAGATttttCAGACACTATACAGAT；

C线包被探针：GTACATAGTGATCTGAttttGTACATAGTGATCTGA。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述逆转录酶为AMV或M-MLV。

3.权利要求1或2所述的试剂盒在制备淋病奈瑟菌检测试剂中的应用。