[发明专利]一种BDNF转染骨髓间充质干细胞的转染方法

权利要求书

1.一种BDNF转染骨髓间充质干细胞的转染方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)转染要求：待293T细胞融合度达到70％-80％时进行转染；

2)质粒的孵育：将质粒、慢病毒转染试剂及无血清MEM 500μl，分别室温孵育5min后，再混合孵育20min，孵育过程中隔5min轻轻震荡EP管；

3)细胞转染：每皿293T细胞更换为半量新鲜培养基，待质粒-转染试剂孵育结束后缓慢将混合液加入到培养皿里，6h后更换为新鲜的培养基；

4)收集24h、48h病毒上清，置于4℃环境保存备用；

5)病毒原液浓缩：将病毒上清以转速1000r/min离心5min，取上清，用100kd超滤管过滤，然后在4℃条件下，以转速4500g/min离心10min，将截留液用0.22um滤器过滤，收集滤液；

6)细胞转导：取第二代的鼠源BMSCs，待融合度达到80％-90％时胰酶消化，细胞计数，以3×10⁵个/ml，2ml细胞悬液、2ml病毒浓缩液及40μl病毒转导助转剂混匀种植于100mm细胞培养皿中，置于37℃培养箱，24h后更换为正常培养基，72h后观察细胞转导情况。

2.如权利要求1所述的一种BDNF转染骨髓间充质干细胞的转染方法，其特征在于，所述步骤2)中，包装质粒PAX2：PMD2G使用比例为3：1，包装质粒和目的质粒用量为1：1，质粒总量为40ug，慢病毒转染试剂用量为40μl。