[发明专利]一种沙眼衣原体检测胶体金层析试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种沙眼衣原体核酸检测胶体金层析试剂盒，其特征在于，所述试剂盒是基于RNA恒温扩增-金探针层析技术，包括：

1）扩增反应液：含40 mM pH 8.0的Tris-HCl，12 mM MgCl₂，70 mM KCl，15% DMSO，5mMDTT，每种dNTP各1 mM，每种NTP各2mM，扩增引物各0.2 µM，扩增中需要两对引物：CT扩增引物、内参基因扩增引物：

（1）CT扩增引物：

CT-R引物（5’-3’）： TAATACGACTCACTATAGGGAGATCGTAACGCCTCTTCATCGG；

CT-F引物（5’-3’）：CATGCAGCACGTTTTGCAAC；

（2）内参基因扩增引物：

内参-R引物（5’-3’）：TAATACGACTCACTATAGGGAGAAGTGGGTAATTTGCGCGC；

内参-F引物（5’-3’）： GCGACGACCCATTCGAAC ；

2）扩增酶：包含三种，逆转录酶、T7 RNA聚合酶和RnaseH；

3）核酸提取试剂：细胞裂解液；

4）检测液：包含金探针，为胶体金颗粒标记的核酸探针、每个指标的特异探针、C线显色探针，每个指标特异探针有两种，分别为CES系列和LES系列，其中CES系列和LES系列又可以设计多条，具体如下：

（1）金探针

金探针5’ 端被巯基化修饰，所述序列为：

5’-CATCTGCAAGCTCCGTCATCCAGTAGATCTCCAtttttAGAAGGCGTCCCAGATTGAGGC-3’；

（2）沙眼衣原体CT特异探针

CT-CES1（5’-3’）：AGGGCGACCTGGAGTATttttAGTGCACTGAGAATGTGCAG；

CT-CES2（5’-3’）：CCACGGATTTTATTCGTAttttAGTGCACTGAGAATGTGCAG ；

CT-LES1（5’-3’）：TCTTCTTCAAGATGACGAttttGCCTCAATCTGGGACGCCTTCT；

CT-LES2（5’-3’）：TGGACAAGTATTACAAACttttGCCTCAATCTGGGACGCCTTCT；

CT-LES3（5’-3’）：TCACTCCATTTCCGCTGGttttGCCTCAATCTGGGACGCCTTCT；

（3）内参18S特异探针:

内参-CES1（5’-3’）：GTCTGCCCTATCAACTTTttttCAGTCAGTGAGGAGCGTAT；

内参-CES2（5’-3’）：CGATGGTAGTCGCCGTGCttttCAGTCAGTGAGGAGCGTAT；

内参-LES1（5’-3’）：CTACCATGGTGACCACGGttttGCCTCAATCTGGGACGCCTTCT；

内参-LES2（5’-3’）：GTGACGGGGAATCAGGGTttttGCCTCAATCTGGGACGCCTTCT；

内参-LES3（5’-3’）：TCGATTCCGGAGAGGGAGttttGCCTCAATCTGGGACGCCTTCT；

（4）C线显色探针（5’-3’）：

TCAGATCACTATGTAttttGCCTCAATCTGGGACGCCTTCT；

5）试纸条：所用试纸条被固定于PVC底板上，从左往右依次是样品垫、NC膜、吸水纸；NC膜上有质控线C线和两条检测线T线，从样品垫到吸水纸方向分别为CT-T、内参-T、和C线，CT-T处包被CT包被探针、内参-T处包被内参包被探针、C线处包被C线包被探针，具体序列为：

CT包被探针（5’-3’）：

CTGCACATTCTCAGTGCACTttttCTGCACATTCTCAGTGCACT；

内参包被探针（5’-3’）：

ATACGCTCCTCACTGACTGAttttATACGCTCCTCACTGACTGA；

C线包被探针（5’-3’）：

ACGAACGACGTGCTTCTAGGttttACGAACGACGTGCTTCTAGG。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述逆转录酶为AMV或M-MLV。

3.权利要求1或2所述的试剂盒在制备沙眼衣原体检测试剂中的应用。