[发明专利]一种基于illumina测序平台的DNA文库构建试剂盒、文库构建方法和应用

权利要求书

1.一种DNA文库构建试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括P7接头和P5接头；

所述P7接头的核酸序列如SEQ ID NO:1～5所示；

所述P5接头的核酸序列如SEQ ID NO:6～10所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括酶组合物和/或缓冲液；

优选地，所述酶组合物包括末端修复酶、PCR扩增酶或T4 DNA连接酶中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述缓冲液包括末端修复缓冲液和/或连接缓冲液。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述末端修复酶包括T4多聚核苷酸激酶、T4 DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶或Klenow片段中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述T4多聚核苷酸激酶的工作浓度为0.1～0.4U/μL；

优选地，所述T4 DNA聚合酶的工作浓度为0.05～0.09U/μL；

优选地，所述Taq DNA聚合酶的工作浓度为0.03～0.07U/μL；

优选地，所述Klenow片段的工作浓度为0.01～0.03U/μL。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR扩增酶包括Q5热启动DNA聚合酶；

优选地，所述Q5热启动DNA聚合酶的工作浓度为1×；

优选地，所述T4 DNA连接酶的工作浓度为10～30U/μL。

5.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述末端修复缓冲液包括10×T4 DNA连接酶缓冲液、dNTP混合液、PEG8000和超纯水；

优选地，所述10×T4 DNA连接酶缓冲液包括ATP、Tris-HCl、MgCl₂、DTT和超纯水；

优选地，所述10×T4 DNA连接酶缓冲液的工作浓度为0.8～2×；

优选地，所述dNTP混合液的工作浓度为0.3～0.6mM；

优选地，所述PEG8000的工作浓度为5～10wt％。

6.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述连接缓冲液包括ATP、Tris-HCl、MgCl₂、DTT、PEG8000、DMSO和超纯水；

优选地，所述ATP的工作浓度为0.1～0.5mM；

优选地，所述Tris-HCl的工作浓度为0.01～0.05M；

优选地，所述MgCl₂的工作浓度为0.001～0.003M；

优选地，所述DTT的工作浓度为0.001～0.003M；

优选地，所述PEG8000的工作浓度为5～10wt％；

优选地，所述DMSO的工作浓度为0.8％～2％。

7.根据权利要求1-6任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括PCR引物；

优选地，所述PCR引物的核酸序列如SEQ ID NO:11～12所示。

8.一种文库构建方法，其特征在于，所述方法采用如权利要求1-7任一项所述的试剂盒进行文库构建；

优选地，所述方法包括以下步骤：

(1)对基因组DNA进行超声处理，得到片段化的基因组DNA；

(2)采用末端修复酶和末端修复缓冲液对片段化基因组DNA进行末端修复和加A反应；

(3)采用T4 DNA连接酶和连接缓冲液对末端修复加A产物进行P7、P5接头连接反应；

(4)采用磁珠进行连接产物纯化；

(5)采用Q5热启动DNA聚合酶和PCR引物对纯化产物进行PCR扩增，构建得到所述DNA文库。