[发明专利]一种提高凝结芽孢杆菌存活率的保藏方法和保藏剂

说明书

本发明公开了一种提高凝结芽孢杆菌存活率的保藏方法和保藏剂。该保藏方法包括将形成有芽孢的凝结芽孢杆菌菌液与保藏剂混合保藏，所述保藏剂包括0.35～1g/mL还原剂、20～40g/mL保护剂、5～12g/mL蔗糖和5～8g/mL填充剂，提高了凝结芽孢杆菌自身的抗逆性，同时配合保藏剂的使用，有效延长了凝结芽孢杆菌的保藏质量和保藏时限。

技术领域

本发明涉及凝结芽孢杆菌技术领域，具体而言，涉及一种提高凝结芽孢杆菌存活率的保藏方法和保藏剂。

背景技术

益生菌通过抑制胃肠道病原菌，维持菌群生态平衡来发挥益生作用，安全无害，是运用较广的产品之一。

凝结芽孢杆菌是一种革兰氏阳性菌，胞体呈杆状，两端钝圆，单个、成对或短链状，无鞭毛，芽孢端生，兼性厌氧，能分解糖类生成乳酸。菌体生长的最适温度为37℃～45℃，最适pH为6.6-7.0。其不但具有乳酸菌和双歧杆菌的益生作用，还具有芽孢杆菌的显著特点：耐高温，耐酸，耐胆盐。

由于其兼具乳酸菌和芽孢菌共同的特点，以及良好的安全性，凝结芽孢杆菌被越来越广泛的应用于畜牧行业中。

冷冻干燥是生产益生菌发酵剂最常用的工艺，但大多数益生菌在冷冻和干燥后其正常的生理功能和代谢活性会遭受不同程度的损伤，导致细胞活性和发酵活力下降甚至丧失。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供提高凝结芽孢杆菌存活率的保藏方法和保藏剂。该保藏方法将形成有芽孢的凝结芽孢杆菌进行保藏，同时配合保藏剂的使用，能有效延长凝结芽孢杆菌的保藏质量和保藏时限。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明实施例提供一种提高凝结芽孢杆菌存活率的保藏方法，其包括将凝结芽孢杆菌与保藏剂混合保藏；

所述凝结芽孢杆菌为形成含有芽孢的菌液；

所述保藏剂包括以下组分：0.35～1g/mL还原剂、5～8g/mL填充剂、5～12g/mL蔗糖、以及20～40g/mL保护剂。

目前，保藏凝结芽孢杆菌的方法是通常将凝结芽孢杆菌于琼脂平板培养24h～48h，再收集菌株，直接用一定浓度的甘油与菌株混合均匀后放入-20℃条件下冷藏。

而在本申请中，首先将凝结芽孢杆菌培养成包含有芽孢的菌液后，再进行保藏，利用芽孢自身的抗逆性，延长凝结芽孢杆菌在低温环境的保藏时限。同时，保藏时配合采用本申请提供的保藏剂。

保藏剂中的还原剂，能消耗培养基中的氧气，使菌体处于厌氧状态，减少菌体的氧化作用；保藏剂中的保护剂具有亲水性，可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。而填充剂在慢速冻结时会结晶，从而为细胞提供支撑结构，且不会与细胞内活性组分发生反应。

在可选的实施方式中，所述保藏剂包括以下组分：0.45～0.65g/mL还原剂、5～7g/mL填充剂、5～8g/mL蔗糖、以及30～40g/mL保护剂。在该组分配比下，能进一步延长凝结芽孢杆菌的保藏质量，保持凝结芽孢杆菌冷藏后的生理功能和代谢活性，有效延缓冷藏后细胞活性和发酵活力的丧失或下降。

在可选的实施方式中，所述填充剂包括甘露醇。

优选地，所述保护剂包括甘油和/或海藻糖。

在可选的实施方式中，所述还原剂为半胱氨酸盐酸盐、维生素D、硫代硫酸钠和乙二胺四乙酸中的至少一种。

在可选的实施方式中，所述还原剂为半胱氨酸盐酸盐。

在可选的实施方式中，所述菌液与所述保藏剂按(0.5～1.5)：1的体积比混合。