[发明专利]一种甾体化合物的制备方法

权利要求书

1.一种含酯基的甾体化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.将分枝杆菌进行前处理；

S2.将前处理后的分枝杆菌接种到培养基中发酵，得发酵液；

S3.对步骤S2得到的发酵液进行提纯，即得；

其中，所述含酯基的甾体化合物的结构式为：

所述分枝杆菌为分枝杆菌ST-3-8，为偶发分枝杆菌，保藏编号为：CGMCC No.18995；

所述步骤S2中培养基包括以下质量百分比的组分：植物甾醇1-10％、有机氮源2-9％、无机盐0.15-0.8％、助剂0.1-0.5％、水余下量；所述植物甾醇为谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇、菜籽甾醇的混合物；所述助剂为聚氧乙烯氧丙烯甘油；

步骤S3中，提纯过程包括：

1)将发酵液进行板框压滤，取滤饼；

2)向步骤1)中的滤饼中加入3-5倍滤饼重量的第一醇类溶剂，在45-55摄氏度下，搅拌40-90min，然后板框压滤，取滤液；

3)将步骤2)中的滤液进行减压浓缩，温度为40-50摄氏度，浓缩到原体积15-25％时，向釜中加入原体积5-15％的水，继续减压浓缩至无醇类溶剂；

4)将步骤3)处理后的物料通过板框压滤，干燥，得粗品；

5)向粗品中加入2-5倍粗品体积的醚类溶剂，加热到38-45摄氏度，搅拌60-90min，然后降温至0-5摄氏度进行结晶；

6)将步骤5)得到的物料进行离心，取离心后的母液；

7)将离心后的母液进行真空浓缩，得固体物料A；

8)向固体物料A中加入2-5倍固体物料A体积的第二醇类溶剂，搅拌50-80min，离心，得到的固体物料即为所述含酯基的甾体化合物；

所述第一醇类溶剂为甲醇；第二醇类溶剂为体积比为70％的甲醇水溶液。

2.如权利要求1所述的含酯基的甾体化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，将分枝杆菌进行前处理包括以下过程：

(1)一级培养：将2-6mL的分枝杆菌接种到含有200mL第一培养液的摇瓶中，在30-35摄氏度的摇床上震荡培养40-56小时，得摇瓶种子液；

(2)二级培养：将200-1000mL摇瓶种子液接种到含有400L第二培养液的一级种子罐中，通入无菌空气，100-200rpm下搅拌及在30-35摄氏度下培养36-48小时，得一级种子罐种子液；

(3)三级培养：将300-500L一级种子罐种子液加入到含有5-8m³第三培养液的二级种子罐中，通入无菌空气，100-200rpm下搅拌及在30-35摄氏度下培养2-3天，即得。

3.如权利要求1所述的含酯基的甾体化合物的制备方法，其特征在于，所述有机氮源选自玉米浆、黄豆饼粉、玉米淀粉、蛋白胨、棉籽饼粉、花生饼粉、酵母粉、鱼粉、麸皮中的至少一种。

4.如权利要求3所述的含酯基的甾体化合物的制备方法，其特征在于，所述有机氮源为玉米浆和黄豆饼粉；所述玉米浆和黄豆饼粉的质量比为1：(0.8-1)。

5.如权利要求1所述的含酯基的甾体化合物的制备方法，其特征在于，所述无机盐选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫酸钠、硫酸钾、硫酸镁中的至少一种。