[发明专利]烟草NtYcf45-like蛋白及其应用

说明书

本发明属于烟草基因工程领域，具体涉及一个烟草NtYcf45‑like蛋白及其应用专利申请。编码基因NtYcf45‑like含有1968个碱基，碱基序列如SEQ ID NO.1所示;烟草NtYcf45‑like蛋白由655个氨基酸残基组成,氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本申请中，发明人基于相关烟草基因工程研究进展，通过对特定烟草NtYcf45‑like蛋白的初步研究，发现其与烟草甘油酸物质含量高度相关，在将该基因沉默后，烟草中甘油酸物质含量发生了明显降低。基于这一特性，可为烟叶品质调控、烟草新品种培育奠定一定技术基础。

技术领域

本发明属于烟草基因工程领域，具体涉及一个烟草NtYcf45-like蛋白及其应用专利申请。

背景技术

人们通常所吸食的烟草属双子叶植物纲管花目茄科烟草属植物，烟草属(Nicotiana) 有60 多个种，而用于制备吸食的主要为两个栽培种，分别为普通烟草(又称红花烟草，Nicotiana tabacum)和黄花烟草(Nicotiana rustica)，其中前者占据主要栽培面积。栽培烟草按烟叶品质特点、生物学性状和栽培调制方法等特点，可分为烤烟、晒烟、晾烟、白肋烟、香料烟和黄花烟六个类型，其中烤烟是我国栽培最广的普通烟草。

作为一种叶用经济作物，烤烟的栽培技术有别于其它大田作物，不仅要求有一定的烟叶产量，而且更注重烟叶品质。烟叶品质决定烟叶的可用性，直接影响卷烟商品的色、香、味和商品价值，也关系到烟农的经济效益，是烟草行业的生命和出发点。也因此，为满足国内外卷烟企业对优质烟叶不断增长的需求，必须不断提高烟叶品质和安全性。

有机酸是烟草化学组成中一个重要的组成部分。烟草中的有机酸主要是指除氨基酸以外的有机酸, 其种类繁多,含量差异大, 总含量一般为12%~16%，且大部分以与碱金属或有机碱合成盐或以酯类的形式存在。烟草中有机酸通常分为挥发酸、半挥发酸和非挥发酸。已有研究，普遍认为有机酸不仅在烟草生长发育过程中起着重要的作用,而且对烟叶和卷烟的质量有着重要的影响。一般而言，有机酸可以增加烟气酸性, 醇和烟气,并使烟味变得甜润舒适。尤其是挥发性有机酸, 尽管其含量很低（最多达0.1%~0.2%, 有的甚至只有0.01%~0.05%）, 但其对烟叶感官质量的影响却远远大于多元酸和高级脂肪酸。

总之，随着烟草基因工程深入，结合有机酸类物质组分对于烟叶品质的重要影响，对于与烟草中有机酸类物质相关编码基因的深入研究和开发，可为烟草品质调控奠定良好的技术基础。

发明内容

基于烟草甘油酸物质含量调控基因的研究，本发明目的在于提供一个烟草NtYcf45-like蛋白基因及其在烟草甘油酸物质含量调节方面的应用，从而为烟叶品质调控、烟草新品种培育奠定一定技术基础。

本申请所采取的技术方案详述如下。

烟草NtYcf45-like蛋白的编码基因NtYcf45-like，包括1968个碱基，具体碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

所述NtYcf45-like基因在叶片中甘油酸物质含量调控中的应用，利用基因沉默技术、或者基因超表达方法，通过调节NtYcf45-like基因表达量，来调节控制叶片中甘油酸物质含量高低。

所述NtYcf45-like基因的PCR扩增制备方法，包括如下步骤：

（1）提取（具体例如以烟草K326叶片为样品）基因组，并反转录为cDNA备用；

（2）设计PCR扩增用引物，并进行PCR扩增，具体引物序列设计如下：