[发明专利]一种大麦黄花叶病病毒的幼苗叶片快速接种方法

说明书

本发明属于农业技术领域，涉及植物病害接种技术，具体涉及一种大麦黄花叶病病毒的幼苗叶片快速接种方法，包括如下步骤：选取具有大麦黄花叶病病害特征的大麦，取其大麦黄花叶病病斑明显的绿叶，低温保存备用；将解冻的病叶与K₂HPO₄缓冲液、石英砂混合，碾压病叶使其出汁得到病毒汁液；使用棉质手套蘸取病毒汁液及石英砂，从叶片的基部夹住叶片向叶尖端滑动，完成接种。本方法采用棉质手套夹持快速摩擦接种，能够在不影响被接种幼苗正常生长的前提下，简化操作过程、灵敏性高、提高接种效率。

技术领域

本发明属于农业技术领域，涉及植物病害接种技术，具体涉及一种大麦黄花叶病病毒的幼苗叶片快速接种方法。

背景技术

大麦黄花叶病是欧亚冬大麦区的主要病害之一，常发生在我国长江中下游及黄淮冬大麦区，尤以江浙沪地区发病严重。大麦黄花叶病是由大麦黄花叶病毒(Barley yellowmosaic virus,BaYMV)、大麦温和花叶病毒(Barley mild mosaic virus,BaMMV)或两者病毒复合体引起的病毒病。在田间条件下，病毒以土壤中的禾谷多黏菌(Polymyxa graminis)作传播介体，从大麦根部侵染发病。因病毒寄存于真菌介体内在土壤中存活的时间长，大麦黄花叶病难以采用化学方法防治。挖掘抗病种质、培育抗病品种是防控该病害最经济有效的途径。该病害抗性主要采取田间抗性鉴定，发病程度受年度间气候影响较大，每年仅能鉴定一次。因此，在室内建立一种大麦黄花叶病病毒的幼苗叶片快速接种方法是必要的。

大麦黄花叶病毒已有的室内接种方法包括常规汁液摩擦接种、喷枪接种及禾谷多粘菌游动孢子接种。常规汁液摩擦接种是将病叶组织在研钵中碾压，再加入少量磷酸缓冲液与石英砂，混匀成含石英砂的病毒汁液，用脱脂棉球或直接用碾碎的植物组织蘸取汁液，在健康大麦幼苗叶片上轻轻摩擦2-3次，一周后重复接种。该方法存在同一叶片正反面需多次摩擦，且接种力度较难掌握，过轻影响接种成功率；力度过重则叶片死亡，不适用大批量样品接种。喷枪接种是利用喷射压力将加入金刚砂的病毒悬浮液喷射在植株叶片表面，该方法速度较快，但操作难度较大，极易难以喷涂的均匀，且设备费用较高，存在安全隐患。无论常规汁液摩擦接种或喷枪接种，在被接种叶片表面残留较多的石英砂或金刚砂易压弯甚至折断幼苗叶片，影响后期的生长。有科研工作者在接种完成后使用清水冲洗残留物，无形中增加工作量、病毒汁液的浓度也会因此降低，影响接种效果；禾谷多粘菌游动孢子接种是通过沙培体系，利用病根粉末与感病品种培养带毒禾谷多黏菌孢子，再将孢子悬浮液中加入经发芽的大麦苗完成接种。其优点是模拟田间自然发病，避免病毒汁液接种淘汰抗真菌介体而不抗病毒的大麦品种的局限性。缺点是体系的构建非常复杂，真菌介体也存在侵染效率的问题，试验误差较大。

因此，急需发明一种简捷、高效的大麦黄花叶病病毒的幼苗叶片接种方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种大麦黄花叶病病毒的幼苗叶片快速接种方法，本方法采用棉质手套夹持快速摩擦接种，能够在不影响被接种幼苗正常生长的前提下，简化操作过程、提高接种效率，克服现有接种方法的部分缺陷。

为了达到上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种大麦黄花叶病苗期室内快速接种方法，包括如下步骤：

选取具有大麦黄花叶病病害特征的大麦，取其大麦黄花叶病病斑明显的绿叶，低温保存备用；

将解冻的病叶与K₂HPO₄缓冲液、石英砂混合，碾压病叶使其出汁得到病毒汁液；

用灭菌后的棉布手套蘸取病毒汁液及石英砂，从叶片的基部夹住叶片向叶尖端滑动，完成接种。

进一步的，所述大麦病叶的保存条件为-80℃冰箱保存。