[发明专利]高效清除细胞培养过程中微生物污染的组合物及方法

说明书

本发明提供一种高效清除细胞培养过程中微生物污染的组合物及方法，该组合物由喹诺酮类抗生素、氨基糖苷类抗生素和至少两种抗菌剂组成；本发明提供的组合物及方法在不灭活、无需判断污染源且保证细胞活性的基础上，可强效清除大部分革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、真菌、支原体，解除细胞系污染状态并使其能够再次被利用。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，特别涉及一种高效清除细胞培养过程中微生物污染的组合物及方法。

背景技术

细胞培养是体外扩增细胞的一种常规实验技术，细胞培养成功的关键之一是控制污染，细菌、真菌、支原体都是引起培养细胞污染的微生物。

目前培养的细胞一旦发生细菌、真菌或支原体污染，研究人员大多的解决方式是灭活后丢弃。重新复苏冻存细胞再培养传代。但是如果细胞是非常珍贵无法替代的，上述操作存在巨大的浪费。如何在发现污染后，成功挽救珍稀细胞系，是许多实验室遇到的难题。

抗生素的联合用药由来已久，抗生素联合应用的目的是在于获得最佳协同作用，提高疗效。联合用药时应根据杀菌的机理及抑菌的快慢进行合理组合，通常繁殖期杀菌剂加静止期杀菌剂有协同作用，繁殖期杀菌剂和速效抑菌剂有拮抗作用，繁殖期杀菌剂加慢效抑菌剂无影响，静止期杀菌剂加速效抑菌剂有协同使用，速效抑菌剂加慢效抑菌剂有协同作用。在用药时应发挥协同和相加作用，避免拮抗。传统理论认为，三种或更多抗生素联合对药效的增益不明显，甚至药物之间的相互作用会导致它们丧失基本的疗效。

传统清除微生物污染的方法手段相当有限。当发现污染时，微生物已进入快速增殖期，随着时间的持续，对细胞系的毒性也会随之加大。研究人员必须迅速做出决策-判定污染源及使用的抗生素方案。此时所做的决策往往是主观经验性的，所使用的抗生素组合经常为青链霉素、环丙沙星、庆大霉素、两性霉素B等抗生素中1-2种。添加抗生素后，微生物的增殖虽被一定程度的抑制，但离杀灭还有一段时间过程，期间微生物的代谢产物对培养中的细胞毒害作用仍旧持续。

由于上述方法学的限制：无法准确快速判断污染的微生物种类和数量、无法准确快速判断污染的微生物对应用抗生素的敏感性、使用抗生素选择的组合方案起效时间缓慢，以致错失最佳的细胞拯救时间、清除污染的成功率低。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种高效清除细胞培养过程中微生物污染的组合物及方法。

本发明其中一个技术方案提供一种高效清除细胞培养过程中微生物污染的组合物，该组合物由喹诺酮类抗生素、氨基糖苷类抗生素和至少两种抗生素组成。

利用多种抗生素的联用能有效对抗耐药细菌；整体产生的效果比单个成分效果的总和好。利用抗生素组合处理方案，最终可解除细胞系污染状态并使其能够再次被利用，并有效避免细胞资源的浪费。

进一步改进的方案中，所述抗生素选自多肽类抗生素、头孢菌素类抗生素、吡格类抗生素、嘧啶类抗菌剂、棘白菌素类抗生素或青霉素类抗生素。

进一步改进的方案中，所述组合物由质量比为1-100:5-60:10-80:10-80:0.0025-5:0.01-4的喹诺酮类抗生素、氨基糖苷类抗生素、多肽类抗生素、头孢菌素类抗生素、吡格类抗生素、嘧啶类抗菌剂组成；优选由质量比为6:20:15:12:2:0.8的喹诺酮类抗生素、氨基糖苷类抗生素、多肽类抗生素、头孢菌素类抗生素、吡格类抗生素、嘧啶类抗菌剂组成。

进一步改进的方案中，所述组合物由喹诺酮类抗生素、氨基糖苷类抗生素、棘白菌素类抗生素和青霉素类抗生素组成，其中喹诺酮类抗生素、氨基糖苷类抗生素、棘白菌素类抗生素和青霉素类抗生素的比例为1-100μg：50-200IU：0.25-25μg：50-200IU；优选为6μg：100IU：15μg：100IU。