[发明专利]一种颗粒间相对运动的DNA步行器及其生物传感的应用

权利要求书

1.一种颗粒间相对运动的DNA步行器，其特征在于，所述DNA步行器包括行走颗粒及轨道颗粒，所述行走颗粒由第一金纳米粒及封闭的行走链构成，所述行走链为单链DNA，其中包含DNAzyme序列，其中一端与金纳米粒连接，另一端结合封闭链；所述封闭链包含待测目标的互补序列；

所述轨道颗粒由第二金纳米粒及荧光基团标记的轨道链构成，所述轨道链为单链DNA，包含与行走链互补的序列；

所述DNA步行器还包括补充组件，所述补充组件用于提供Mg²⁺。

2.如权利要求1所述颗粒间相对运动的DNA步行器，其特征在于，所述行走链包括8-17EDNAzyme序列。

3.如权利要求1所述颗粒间相对运动的DNA步行器，其特征在于，所述第一金纳米粒或第二金纳米粒粒径为10~15nm。

4.如权利要求1所述颗粒间相对运动的DNA步行器，其特征在于，所述第一金纳米粒或第二金纳米粒以HAuCl₄为原料，通过柠檬酸还原法制备。

5.权利要求1-4任一项所述颗粒间相对运动的DNA步行器的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

将行走链及封闭链混合，以加热退火的方式对行走链进行封闭，还原行走链中的DNA二硫键，将行走链与第一金纳米粒混合，在搅拌过程中加入NaCl继续搅拌并通过水洗步骤以及将修饰好的第一金纳米粒最终分散于Tris-HCl缓冲液中得到行走颗粒；

将还原后的轨道链与第二金纳米粒混合搅拌，并通过加盐，水洗，重新分散于Tris-HCl缓冲液的步骤得到轨道颗粒。

6.如权利要求5所述颗粒间相对运动的DNA步行器的制备方法，其特征在于，所述行走链与封闭链的比例为0.8~1.2:4~6。

7.如权利要求5所述颗粒间相对运动的DNA步行器的制备方法，其特征在于，所述行走链及封闭链混合后加热至88~92℃。

8.如权利要求5所述颗粒间相对运动的DNA步行器的制备方法，其特征在于，所述封闭后的行走链与第一金纳米粒加入的摩尔比为140~160:1；所述轨道链与第二金纳米粒加入的摩尔比为190~210:1。

9.权利要求1-4任一项所述颗粒间相对运动的DNA步行器在制备核酸生物传感器中的应用。

10.一种核酸生物传感器，其特征在于，所述传感器包括权利要求1-4任一项所述颗粒间相对运动的DNA步行器。

11.如权利要求10所述的一种核酸生物传感器，其特征在于，所述核酸生物传感器的检测方法如下：将待测序列、行走颗粒及MgCl₂加入缓冲溶液中得到混合溶液，孵育一段时间之后加入轨道颗粒后进行反应，反应一段时间后离心检测上清液中的荧光。

12.如权利要求11所述核酸生物传感器，其特征在于，所述缓冲溶液为pH为8~9、包含NaCl的Tris-HCl缓冲溶液。

13.如权利要求11所述核酸生物传感器，其特征在于，所述混合溶液在35~39℃下孵育1~2小时。

14.如权利要求11所述核酸生物传感器，其特征在于，所述反应时间为2~3小时。

15.一种核酸检测试剂盒，其特征在于，所述核酸检测试剂盒包括权利要求1-4任一项所述颗粒间相对运动的DNA步行器。