[发明专利]一种鉴别边缘银鲈与曳丝银鲈的DNA条形码及其鉴别方法和应用

说明书

本发明提供了一种鉴别边缘银鲈与曳丝银鲈的DNA条形码及其鉴别方法和应用，属于分子生物学技术领域，本发明所述边缘银鲈的DNA条形码序列如SEQ ID No.1所示；所述曳丝银鲈的DNA条形码序列如SEQ ID No.2所示。扩增所述的DNA条形码的引物，包括12S‑FD和12S‑RD；所述方法包括以下步骤：提取待鉴别样本的基因组DNA；用所述的引物扩增所述的待鉴别DNA；将扩增产物的序列与DNA条形码进行比对；确定待鉴别样本的种类。利用本发明提供的DNA条形码鉴别边缘银鲈与曳丝银鲈结果稳定，可重复性强。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种鉴别边缘银鲈与曳丝银鲈的DNA条形码及其鉴别方法和应用。

背景技术

边缘银鲈体呈长卵圆形而略高，标准体长约为体高的2.3-2.7倍，体背在背鳍起点处极为弯曲，与水平方向轴约呈40度角。口小唇薄，能伸缩自如，伸出时向下垂。上下颌齿细长，呈绒毛状；锄骨、腭骨及舌面皆无齿。体被薄圆鳞，易脱落；背鳍及臀鳍基底具鳞鞘；侧线完全，呈弧状，至尾鳍基底之侧线鳞数33-35，尾鳍基底之有孔鳞3；侧线上鳞列数3(侧线至背鳍第V棘间，且不含侧线鳞)。背鳍单一，硬棘IX，第III棘最长，但短于头长；臀鳍第II棘粗状，但短于基底长；胸鳍短，末端仅及肛门；尾鳍叉形，最长鳍条长约为中央鳍条2倍。体呈银白色，背部较暗。体侧具有四条由背缘延伸至体中央的宽斑块。背鳍淡黄色，第II至第VI棘间鳍腹上半部具黑色斑驳；尾鳍淡黄色，具暗色缘；臀鳍淡橘色，后部稍暗；胸鳍淡黄，末缘淡色。边缘银鲈同曳丝银鲈一样，皆为三亚近海较常见鱼种。其肉质细腻鲜美，具有较高的食用价值。由于边缘银鲈和曳丝银鲈二者形态较为相似，且分布区存在一定重叠，仅凭借形态特征较难将两者区分，因此寻找区分边缘银鲈和曳丝银鲈的可靠标准，从混杂的种质中鉴别、分离种质成为一个迫不及待的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种鉴别边缘银鲈与曳丝银鲈的DNA条形码及其鉴别方法和应用；采用微型DNA条形码将两种银鲈进行鉴别，操作简单，易于掌握，准确性高；有助于解决种质混杂等问题，为种质保护、合理利用以及种质的生物多样性研究提供技术支撑。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种鉴别边缘银鲈与曳丝银鲈的DNA条形码，所述边缘银鲈的DNA条形码序列如SEQ ID No.1所示；所述曳丝银鲈的DNA条形码序列如SEQ ID No.2所示。

本发明提供了扩增所述的DNA条形码的引物，包括12S-FD和12S-RD；所述12S-FD的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述12S-RD的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

本发明提供了一种利用DNA条形码鉴别边缘银鲈与曳丝银鲈的方法，包括以下步骤：

1)提取待鉴别样本的基因组DNA获得待鉴别DNA；

2)用所述的引物扩增步骤1)中所述的待鉴别DNA获得扩增产物；

3)将所述扩增产物的序列与DNA条形码进行比对；如果所述扩增产物序列和边缘银鲈的DNA条形码一致，则待鉴别样本为边缘银鲈；如果所述扩增产物序列和曳丝银鲈的DNA条形码一致，则待鉴别样本为曳丝银鲈。

优选的，步骤2)中所述扩增的扩增体系以25.15μL计，包括以下组分：超纯水17.5μL，10×buffer 2.5μL，dNTPs 2μL，rTaq 0.15μL，待鉴别DNA 1μL，引物12S-FD 1μL，引物12S-RD 1μL。

优选的，步骤2)中所述扩增的扩增程序如下：

94℃预变性3min；94℃变性25s，50℃退火25s，72℃延伸25s，38个循环；72℃延伸5min，4℃保存。

优选的，所述扩增产物的序列通过将扩增产物测序获得。