[发明专利]烟草绿原酸合成基因NtHQT及其应用

权利要求书

1.烟草绿原酸合成基因NtHQT在叶片绿原酸含量调节中应用，其特征在于，利用基因超表达方法，通过上调烟草HQT基因表达量，来提高烟叶中绿原酸含量；

所述烟草绿原酸合成基因NtHQT，碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

2.烟草绿原酸合成基因HQT所编码的转移酶在叶片绿原酸含量调控中的应用，其特征在于，该转移酶与植物叶片中绿原酸含量相关，对该转移酶超表达或者说提高其含量后，叶片中绿原酸含量明显增加；

所述烟草绿原酸合成基因NtHQT所编码的转移酶，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.利用烟草绿原酸合成基因NtHQT的烟草品种培育方法，其特征在于，通过转基因技术，构建含有NtHQT基因的超表达载体，转化烟草，筛选获得绿原酸含量上调的烟草品种；

所述烟草绿原酸合成基因NtHQT，碱基序列如SEQ ID NO.1所示。

4.如权利要求3所述利用烟草绿原酸合成基因NtHQT的烟草品种培育方法，其特征在于，构建含有NtHQT基因的超表达载体时，通过如下步骤制备获得：

（1）设计PCR扩增用引物序列如下：

上游引物F：5'- CAGTCGTCTCACAACATGAAAGAAGCATTAAGTAA-3'，

下游引物R：5'-CAGTCGTCTCATACAAAATTCATACAAATACTTCT-3'；

然后，以烟草基因组cDNA为模板，进行PCR扩增，并回收、纯化扩增产物；

（2）酶切、连接

对步骤（1）中的PCR扩增产物采用BsmBI和Esp3II进行双酶切，同时对pBWA(V)HS-GLosgfp载体采用BsmBI和Esp3II进行双酶切，并分别回收酶切产物，利用T4 DNA连接酶进行连接；

（3）转化、筛选和鉴定

将步骤（2）中的连接产物转化大肠杆菌DH5α，并进行筛选，挑取阳性克隆质粒进行菌落PCR鉴定和测序鉴定，确保重组构建正确，并将最终构建正确重组超表达载体质粒命名为：pBWA(V)HS-NtHQT-Glosgfp。