[发明专利]吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法

权利要求书

1.一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)标准品配制：配制色氨酸标准溶液和犬尿氨酸标准溶液；

2)分别取标准品加入到细胞培养基中得到做标准曲线的标准溶液；

3)系列标准溶液加入乙腈或甲醇处理标准溶液样品，处理后标准溶液样品经高速离心机离心，标准溶液样品准备上机检测；

4)RapidFire液质联用检测标准溶液样品的峰面积，采用标准溶液的浓度和相应的峰面积信号做标准曲线；

5)将色氨酸与细胞加入细胞培养基中，并加入待筛选药物，孵育一段时间，加入乙腈或甲醇处理待测样品，待测样品经高速离心机离心，取上清液准备上机检测；

6)RapidFire液质联用检测待测样品的峰面积，根据步骤4)所得标准曲线，计算样品中色氨酸和犬尿氨酸的浓度，进而判断待筛选药物是否为吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂。

2.根据权利要求1所述的一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，步骤1)中，所述色氨酸标准溶液为一系列不同已知浓度的溶液；所述犬尿氨酸标准溶液为一系列不同已知浓度的溶液；

优选地，步骤1)中，色氨酸标准溶液和犬尿氨酸标准溶液的系列浓度为30,000、10,000、3,000、1,000、300、100、30、10、3μM。

3.根据权利要求1所述的一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，步骤1)中，配制色氨酸标准溶液和犬尿氨酸标准溶液的溶剂选择甲醇或乙腈或水中的一种或多种。

4.根据权利要求1所述的一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，步骤2)中，分别取标准品5μL加入到45μL细胞培养基中得到做标准曲线的标准溶液，浓度为3,000、1,000、300、100、30、10、3、1、0.3μM。

5.根据权利要求1所述的一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，RapidFire液质联用仪器为美国Agilent公司的型号360高通量液相平台联用AB Sciex公司的型号API4000+四级杆质谱仪。

6.根据权利要求1所述的一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，步骤4)中，利用RapidFire液质联用进行检测，其中条件为：利用流动相A为0.1％甲酸或乙酸水溶液，流动相B为0.1％甲酸、乙酸或乙腈/甲醇溶液；色谱柱为室温操作；泵一的流速为1ml/min，泵一为流动相A，泵二的流速为1ml/min，泵二为流动相B，泵三的流速为0.75ml/min，泵三为流动相B，吸样品时间500ms，进样/冲洗3000ms，洗脱3000ms，平衡1000ms。

7.根据权利要求6所述的一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，所述色谱柱为C4、C18或HILIC一种。

8.根据权利要求1所述的一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，步骤4)中，利用RapidFire液质联用进行检测，质谱仪采用电喷雾离子源，正离子扫描模式，扫描方式为多反应检测模式，定量离子对色氨酸：205/188，碎裂电压45V，碰撞能量14eV；定量离子对犬尿氨酸离子：209/94，碎裂电压45V，碰撞能量19eV；喷雾电压5500V，离子源温度600℃。

9.根据权利要求1所述的一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，步骤6)中RapidFire液质联用检测待测样品的峰面积的条件与步骤4)利用RapidFire液质联用进行检测的条件相同。

10.根据权利要求1所述的一种吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂的筛选方法，其特征在于，步骤6)，在不同浓度的不同待筛选药物处理细胞后，通过RapidFire液质联用检测待测样品的峰面积，并根据标准曲线，得到样品中犬尿氨酸的浓度，根据浓度计算得出IC50，进而判断待筛选药物是否为吲哚胺2，3-二氧化酶抑制剂。