[发明专利]一种具有防治香蕉枯萎病功能的芽孢杆菌及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种具有防治香蕉枯萎病功能的芽孢杆菌及其制备方法和应用，所述的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌YX‑11。所述的枯草芽孢杆菌是通过培养材料准备、分离培养、拮抗内生细菌筛选和拮抗内生细菌YX‑11的鉴定步骤得到的。所述的枯草芽孢杆菌YX‑11的菌剂，是以所述的枯草芽孢杆菌YX‑11经种子液一级制备、种子液二级制备和发酵得到的菌剂。所述的枯草芽孢杆菌YX‑11的菌剂的制备方法，包括一级种子液制备、二级种子液制备和发酵液制备步骤。所述枯草芽孢杆菌YX‑11为活性成分的制剂绿色环保无残留，不仅对香蕉枯萎病具有显著的防治作用，而且对植株生长具有促进作用。

技术领域

本发明属于芽孢杆菌微生物分离培养技术领域，具体涉及一种具有防治香蕉枯萎病功能的芽孢杆菌及其制备方法和应用。

背景技术

香蕉枯萎病是由尖孢镰刀菌古巴专化型引起的一种维管束真菌性土传病害，会导致根和茎吸收传导养分受阻，生长不良、萎蔫、矮化，产量和品质受损，以致减产，严重的导致绝产，该病对世界香蕉产业造成严重危害和经济损失。目前香蕉枯萎病的发病面积正在逐步加大，由于常规药剂对香蕉枯萎病防治效果不理想，防治比较困难，目前尚无防治香蕉枯萎病的特效药剂，已成为香蕉产业发展的瓶颈，严重地制约了香蕉生产与发展。由于化学药剂和物理防控对于病害的防治效果较差，基于生物产业的快速发展，采用农用微生物菌剂进行枯萎病的防控，既能避免作物产生抗药性，又能实现绿色环保无残留，所以研制一株高效防香蕉枯萎病的功能菌株及其制成的防控产品对于香蕉产业的健康持续发展尤为重要。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种安全、环保、防治效果显著的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)YX-11；第二目的在于提供所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)YX-11的制备方法；第三目的在于提供所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)YX-11的菌剂；第四目的在于提供所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)YX-11菌剂的制备方法；第五目的在于提供枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)YX-11菌剂在防治香蕉枯萎病方面的应用。

本发明的第一目的是这样实现的：一种具有防治香蕉枯萎病功能的芽孢杆菌，所述的芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)YX-11，所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)YX-11的保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日为：2019年09月02日，保藏编号为：CGMCCNo.18456。

本发明的第二目的是这样实现的：一种具有防治香蕉枯萎病功能的芽孢杆菌YX-11的制备方法，包括以下步骤

1)培养材料准备：

选择采摘健康、无病害香蕉植株的香蕉叶片备用；

将LB固体培养基和PDA培养基融化，分别倒入灭菌培养皿，冷却，制成LB培养基平板和PDA培养基平板；其中，LB培养基平板用于分离和保存内生细菌，PDA培养基平板用于培养香蕉枯萎病菌和对峙培养；

2)分离培养：

取香蕉叶片经酒精消毒后，用灭菌水冲洗3～5次，置于灭菌的研钵中研磨成汁，将研磨得到的汁液涂布于LB培养基平板上；随机挑取形态不同的菌落进行纯化培养并保存，将纯化培养所得的其中一株菌株命名为YX-11；

3)拮抗内生细菌筛选：

以香蕉枯萎病菌为指示菌，将挑选出的菌株YX-11采用PDA平板对峙培养法培养，在培养过程中观察菌株YX-11对香蕉枯萎病菌的抑菌作用，并测定其抑菌带宽度大小；

4)拮抗内生细菌YX-11的鉴定：