[发明专利]用于检测MN1基因相对表达量的引物，探针

说明书

本发明公开了用于检测样本中MN1基因相对表达量的引物和探针，包括：检测MN1基因相对表达量的引物MN1‑F、MN1‑R，探针MN1‑Probe，检测内参基因ABL的引物ABL‑F，ABL‑R，探针ABL‑Probe。该引物和探针经测试特异性好，灵敏度高，操作简便。MN1基因表达水平检测可以有助于探讨其与AML的预后转归。

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别是一种用于检测MN1基因相对表达量的引物和探针，采用探针实时荧光定量PCR技术，预测AML预后，MN1基因表达水平检测可以有助于探讨其与AML的预后转归。

背景技术

白血病(1eukemia)是一类起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病，其白血病细胞增殖失控、分化障碍、凋亡受阻，从而停滞在细胞发育的不同阶段。白血病细胞在骨髓中恶性增殖，并广泛浸润肝、脾、淋巴结等各器官，抑制正常造血功能，红细胞、白细胞和血小板生成减少，从而导致贫血、感染、出血、浸润等临床表现，严重危害患者生命。在我国，白血病的发病率约为2.76/10万，急性白血病比慢性白血病多见(约5：5：1)，其中又以急性髓系白血病(acute myelocytic leukemia，AML)最多见(发病率约1.62/10万)。急性髓系白血病的细胞分化停滞在较早阶段，多为原始细胞及早期幼稚细胞，病情发展迅速，自然病程仅为几个月。目前治疗急性髓系白血病主要有两种方法：化疗和骨髓移植，均显著延长了患者的生存期，甚至部分患者得到治愈。然而，化疗耐药、化疗缓解后复发，以及大部分患者无法找到合适供者或不适合做移植仍是目前白血病治疗中的突出难题。所以临床上亟待寻找治疗白血病的新策略。我国学者在急性早幼粒细胞白血病融合基因的结构、功能和应用诱导分化剂全反式维甲酸治疗的研究中取得重大突破，提示针对白血病基因的靶向治疗有可能成为今后白血病治疗乃至所有肿瘤治疗最主要的途径之一。而寻找诱发白血病的关键的异常基因靶点成了目前的研究白血病发生机制和白血病治疗的热点。其中脑膜瘤1(meningioma1，MN1) 基因和微小RNA(microRNA，miRNA)在AML患者中异常表达。脑膜瘤MN1基因位于人类染色体22q11，编码分子量为136KD的核蛋白，该蛋白可间接地与 RAR/RXR或维生素D受体结合，调节靶基因的转录，从而影响髓系的分化。最初发现于脑膜瘤患者，新近研究表明它与白血病，尤其是AML的关系甚为密切。本研究采用半定量RT—PcR方法，对白血病细胞中MN1的表达水平进行了检测，旨在探讨其在AML发生发展中的意义。

发明内容

鉴于现有技术中检测MN1基因的不足，本发明设计了检测内参/目的基因用引物、探针序列，采用荧光定量PCR技术检测WT1两种基因相对表达量。通过调整引物和探针浓度及比例，优化PCR的反应体系和反应条件，可使扩增效率和速率均达到最佳。

用于检测MN1基因相对表达量的引物和探针，其特征在于：所述引物和探针包括：

(1)检测MN1基因的引物MN1-F、MN1-R，探针MN1-Probe，其中，

MN1-F：TGGGAGAAGGCCAAACC

MN1-R：GCAGTGGACAGACAGGCAC

MN1-Probe：FAM-CCAACAGCAAAGAAGCCCACGA-TAMRA

(2)检测内参基因ABL的引物ABL-F，ABL-R，探针ABL-Probe；其中，

ABL-F：GATACGAAGGGAGGGTGTACCA

ABL-R：CTCGGCCAGGGTGTTGAA

ABL-Probe：FAM-TGCTTCTGATGGCAAGCTCTACGTCTCCT-TAMRA。

进一步地，MN1上游引物、下游引物和探针的摩尔比为1:1:1。 ABL-F:ABL-R:ABL-Probe的摩尔比为1:1:1。