[发明专利]人源白细胞蛋白酶抑制因子及其重组制备与应用

说明书

本发明涉及人源白细胞蛋白酶抑制因子及其重组制备与应用，属于生物医药领域。人源白细胞蛋白酶抑制因子含有的氨基酸序列为：(1)由SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列；(2)在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列的N端或/和C端连接标签得到的氨基酸序列；(3)在SEQ ID NO:1SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有所述人源白细胞蛋白酶抑制因子活性的氨基酸序列。制备方法为先构建质粒，再进行诱导表达获得融合蛋白，纯化后，再进行复性浓缩。本发明中的蛋白质在制备治疗代谢性疾病药物中具有重要的应用，能减轻体重，抑制脂肪组织重量的增加，并抑制肝脏脂肪变性。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及人源白细胞蛋白酶抑制因子及其重组制备与应用，尤其涉及重组人WAP蛋白、SWAP1蛋白和SWAP2蛋白用于制备预防和治疗肥胖及代谢疾病的药物的应用。

背景技术

以肥胖和糖尿病为代表的代谢疾病是我国乃至全世界面临的重大健康问题，给人类带来严重的社会影响和经济负担。中国的糖尿病和肥胖患者人数居全球之首，糖尿病患者约为1.14亿，肥胖患者约8900万。同时，据保守估计，糖尿病前期即糖耐量异常的人群在中国也约为1.4亿，这类人将逐步发展成为糖尿病患者。因此，以肥胖和糖尿病为代表的代谢疾病已成为我国严重的公共健康问题。肥胖是因能量代谢失调而导致的身体多余能量以脂肪的方式累积。产生肥胖的原因有很多，过多能量摄入、能量失衡、遗传背景等都有可能导致肥胖的发生。肥胖及其代谢综合征已成为影响全人类健康的最严重的疾病。然而，目前对于肥胖的治疗干预手段非常有限，治疗肥胖及其并发症的新药研发以及治疗手段亟待需要解决。

脂肪组织是机体的内分泌器官，主要负责机体的能量代谢，同时分泌多种脂肪因子参与众多生理病理过程。随着研究的深入，多种新型脂肪分泌因子在代谢疾病中的作用相继被揭示。人WAP是一种非糖基化阳离子小蛋白，属于内源性免疫相关蛋白。WAP是单链蛋白，分子量12kDa，全长人WAP由132个氨基酸组成，其N端含25个氨基酸组成的信号肽，26-132的活性区域含有2个结构相同的乳清酸性蛋白结构域(whey acidic protein,WAP)，每个WAP由8个半胱氨酸残基形成4个二硫键，使其结构相对稳定。

WAP在生物体组织和细胞内广泛表达。主要在呼吸道、消化道和生殖道等粘膜上皮细胞和骨髓细胞内表达和分泌。WAP能特异性抑制丝氨酸蛋白酶活性，具有抗炎症反应、抗菌、抗病毒活性等。WAP也参与细胞增殖、细胞凋亡和免疫功能的调节作用，在创伤修复发挥重要调控功能。WAP也可以通过抑制NF-κB信号通路激活而参与炎症反应。

近年研究发现，WAP也可以由肝胆管上皮细胞、巨噬细胞分泌，在急性肝损伤疾病的调控中发挥功能。有报道显示，WAP在人内脏白色脂肪组织中高表达，外周分泌的WAP与进行性代谢功能障碍密切相关。由此推测，WAP与相关代谢性疾病的发生和发展密切相关。

目前对肥胖、2型糖尿病和非酒精性脂肪肝等多种代谢性疾病的治疗尚缺乏有效的药物。本发明研究了重组人WAP蛋白、SWAP1蛋白和SWAP2蛋白对肥胖中脂肪组织的扩增、肝脏脂肪变性的影响，公开重组人WAP蛋白、SWAP1蛋白和SWAP2蛋白作为治疗代谢疾病的药物的应用潜力。

发明内容

针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种重组蛋白WAP蛋白、SWAP1蛋白和SWAP2蛋白，并应用于肥胖和糖尿病等代谢疾病，本发明的WAP蛋白和WAP两个短肽降低体重，减轻脂肪组织重量，对肥胖症有治疗作用，由此解决现有技术对代谢疾病缺乏有效治疗手段的技术问题。

按照本发明的第一方面，提供了一种人源白细胞蛋白酶抑制因子，所述人源白细胞蛋白酶抑制因子含有的氨基酸序列为：

(1)由SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；或