[发明专利]人源化LAG-3基因改造动物模型的制备方法及应用

权利要求书

1.一种人源化基因改造动物模型的构建方法，其特征在于，所述的人源化基因改造动物模型的基因组中包括人LAG-3基因，所述的人LAG-3基因由人LAG-3基因的外显子2的部分、外显子3的全部和外显子4的部分核苷酸序列组成，或者，由人LAG-3基因的外显子2的部分、外显子3的全部、外显子4的全部、外显子5的全部、外显子6的全部和外显子7的部分核苷酸序列组成，所述的人LAG-3基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：42所示，所述的动物模型为小鼠，所述的人源化基因改造动物模型体内表达人源化LAG-3蛋白，同时内源LAG-3蛋白的表达降低或缺失，所述的人源化LAG-3蛋白由人LAG-3蛋白的部分氨基酸序列和小鼠LAG-3蛋白的部分氨基酸序列组成，所述的人LAG-3蛋白的部分氨基酸序列为SEQ IDNO：4第25-258位或第25-465位所示氨基酸序列，所述的人源化LAG-3蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：44所示氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人LAG-3基因通过内源LAG-3调控元件调控。

3.根据权利要求1-2任一所述的构建方法，其特征在于，使用靶向载体构建人源化基因改造动物模型，所述的靶向载体包含供体DNA序列，其编码供体转换区，所述的供体DNA序列为所述的人LAG-3基因。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化基因改造动物模型基因组中包括人源化LAG-3基因，所述的人源化LAG-3基因由人LAG-3基因的部分核苷酸序列和小鼠LAG-3基因的部分核苷酸序列组成，所述的人LAG-3基因的部分核苷酸序列转录的mRNA序列为SEQ ID NO：3第422-1123位或第422-1747位所示核苷酸序列。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述的人源化LAG-3基因编码权利要求1所述的人源化LAG-3蛋白，或所述的人源化LAG-3基因的核苷酸序列选自下列组中的一种：

a）转录的编码mRNA的序列为SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：43所示的序列；

b）为包含SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：70和/或SEQ ID NO：71所示序列。

6.一种LAG-3基因的靶向载体，其特征在于，所述的靶向载体包含供体DNA序列，其编码供体转换区，所述的供体DNA序列由人LAG-3基因的外显子2的部分核苷酸序列、外显子3的全部核苷酸序列和外显子4的部分核苷酸序列组成；或者，所述的供体DNA序列由外显子2的部分核苷酸序列、外显子3的全部核苷酸序列、外显子4的全部核苷酸序列、外显子5的全部核苷酸序列、外显子6的全部核苷酸序列和外显子7的部分核苷酸序列组成，所述的供体DNA序列如SEQ ID NO：7或SEQ ID NO：42所示，所述的靶向载体包含与待改变的转换区5’端同源的DNA片段，即5’臂，和，所述的与待改变的转换区3’端同源的第二个DNA片段，即3’臂，所述5’臂的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示或所述5’臂的核苷酸序列与NCBI登录号与NC_000072.6的第124914544-124910898位核苷酸序列相同；所述3’臂的核苷酸序列如SEQ IDNO：6所示或所述3’臂的核苷酸序列与NCBI登录号与NC_000072.6的第124903953-124907833位核苷酸序列相同，或者，所述5’臂的核苷酸序列如SEQ ID NO：40所示；所述3’臂的核苷酸序列如SEQ ID NO：41所示。

7.一种特异的靶向LAG-3基因的sgRNA，其特征在于，所述的sgRNA在小鼠LAG-3基因的靶位点位于小鼠LAG-3基因的外显子2和外显子4上；所述的sgRNA靶向的5’端靶位点核苷酸序列如SEQ ID NO：14所示，3’端靶位点核苷酸序列如SEQ ID NO：17所示。