[发明专利]复合菌株联合废弃生物质的中低品位磷矿堆浸方法

权利要求书

1.一种复合菌株联合废弃生物质的中低品位磷矿堆浸方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

(a)收集废弃生物质并进行预处理，得到废弃生物质颗粒；

(b)将磷矿粉与废弃生物质颗粒混合均匀后筑堆，筑堆过程中按照10％-20％的质量比向矿堆中喷洒了包含异养溶磷菌和纤维素降解菌的复合菌液；

(c)将包含异养溶磷菌和纤维素降解菌的复合菌液喷淋到矿堆上进行堆浸；

其中复合菌液的制备方法如下：按照1:1-3的体积比将异养溶磷菌菌液和纤维素降解菌菌液混合均匀，所得混合物接种至含磷矿粉的驯化培养基中于28-30℃下传代驯化培养3-5次，直至菌液中异养溶磷菌和纤维素降解菌的总浓度为10⁶-10⁸个/mL；所述驯化培养基的组成为：5-10g/L葡萄糖、5-10g/L秸秆粉、5-20g/L磷矿粉、2.5-5g/L MgCl₂·7H₂O、0.1-0.2g/L (NH₄)₂SO₄、0.3-0.6g/L MgSO₄·7H₂O、0.1-0.3g/L KCl，溶剂为无菌水；

所述异养溶磷菌为从土壤中分离筛选出的假单胞菌，其分离筛选过程如下：采集三叶草根际土壤样品，将其与无菌水按照50-100g:1L的比例混合均匀，过滤得到上清液；将上清液与溶磷菌富集培养基按照1:5-10的重量比混合，于28-30℃、150-170r/min转速下恒温摇床培养3-6天，得到溶磷菌菌液；将上一步富集得到的溶磷菌菌液接种到溶磷菌固体培养基中，于28-30℃倒置培养3-5天，得到混合溶磷菌菌落；选择单一的菌落利用划线培养的方式于28-30℃纯化培养3-5天，得到纯化的溶磷菌菌株；将纯化的溶磷菌菌株接种至溶磷菌筛选培养基中，在28-30℃、150-170r/min转速下振荡培养3-7天后，比较培养液中可溶磷含量高低，选择该项指标最高的菌株确定为高效异养溶磷菌；所述溶磷菌富集培养基组成为：8-10g/L葡萄糖、5-6g/L Ca₃(PO₄)₂、2.5-5g/L MgCl₂·7H₂O、0.1-0.2g/L (NH₄)₂SO₄、0.3-0.6g/L MgSO₄·7H₂O、0.1-0.3g/L KCl，溶剂为无菌水；所述溶磷菌固体培养基组成为：8-10g/L葡萄糖、5-6g/L Ca₃(PO₄)₂、2.5-5g/L MgCl₂·7H₂O、0.1-0.2g/L (NH₄)₂SO₄、0.3-0.6g/LMgSO₄·7H₂O、0.1-0.3g/L KCl、15-18g/L琼脂，溶剂为无菌水；所述溶磷菌筛选培养基组成为：8-10g/L葡萄糖、5-10g/L磷矿粉、2.5-5g/L MgCl₂·7H₂O、0.1-0.2g/L (NH₄)₂SO₄、0.3-0.6g/L MgSO₄·7H₂O、0.1-0.3g/L KCl，溶剂为无菌水；

所述纤维素降解菌为从腐烂木材中分离筛选出的棘孢木霉菌，其分离筛选过程如下：采集腐烂的木材样品并粉碎，将其与无菌水按照50-100g:1L的比例混合均匀，于28-30℃、150-170r/min转速下恒温摇床培养0.5-3h后充分静置，收集上清液得到纤维素降解菌菌液；将上一步制得的纤维素降解菌菌液接种到纤维素降解菌固体培养基中，于28-30℃倒置培养3-5天，得到混合纤维素降解菌菌落；选择单一的菌落利用划线培养的方式于28-30℃纯化培养3-5天，得到纯化的纤维素降解菌菌株；将纯化的纤维素降解菌菌株接种至纤维素降解菌筛选培养基中，于28-30℃倒置培养3-5天，筛选出具有透明圈的纤维素降解菌菌株；将筛选出的纤维素降解菌菌株接种于液体产酶培养基中，在28-30℃、150-170r/min转速下振荡培养5-7天后，比较培养液中总纤维素酶活高低，选择该项指标最高的菌株确定为高效纤维素降解菌；所述纤维素降解菌固体培养基的组成为：5-10g/L秸秆粉、5-10g/L磷矿粉、0.5-1g/L MgSO₄·7H₂O、0.1-0.2g/L酵母浸粉、0.001-0.002g/L CaCl₂·2H₂O、15-18g/L琼脂，溶剂为无菌水；所述纤维素降解菌筛选培养基的组成为：5-10g/L羧甲基纤维素钠、0.5-1g/L K₂HPO₄、0.25-0.5g/L MgSO₄、0.2-0.25g/L刚果红、15-18g/L琼脂、2-3g/L明胶，溶剂为无菌水；所述液体产酶培养基的组成为：5-10g/L羧甲基纤维素钠、1-2g/L NH₄Cl、0.5-1g/LMgSO₄·7H₂O、1-2g/L KH₂PO₄、1-2g/L酵母浸粉，溶剂为无菌水。