[发明专利]DNA损伤修复体系、DNA文库构建试剂盒及文库构建方法

说明书

本发明提供了一种DNA损伤修复体系、DNA文库构建试剂盒及文库构建方法。该DNA损伤修复体系包括DNA损伤修复酶，DNA损伤修复酶为UDG。通过利用上述含有UDG的DNA损伤修复体系，在文库构建前先对损伤进行修复，对修复后的DNA进行文库构建，能够增加部分文库的转化，满足杂交捕获的用量，并且能够提高所构建得到的文库的质量，提高目的片段的测序深度，降低产出数据中的重复序列，从而提高检测准确性，降低上机成本。

技术领域

本发明涉及文库构建领域，具体而言，涉及一种DNA损伤修复体系、DNA文库构建试剂盒及文库构建方法。

背景技术

早在1948年，Mandel和Métais首次报道了人体血液中游离核苷酸(cfNA)的存在。在报道初期并未引起科学家们对cfNA存在的重视，直到在1994年一篇关于癌症患者的血液中检测到了RAS基因的突变，人们才意识到了cfDNA的重要性。随着细胞游离DNA(cell-freeDNA)在癌症患者的血液中被检测到了微卫星体变异，在过去的十几年中研究人员对于癌症病人血液中cfNAs(DNA,mRNA,microRNAs)研究的大量投入，cfDNA的潜在研究价值越来越显著。

液体活检(Liquid Biopsy)与传统的组织活检相比有着迅速、便捷、损伤性小等众多优点。临床医生可以用它来监测肿瘤对治疗的反应，预测肿瘤复发。从长远角度来看，液体活检还能够帮助医生在患者未出现任何症状的时候发现最初期的肿瘤。同时cfDNA的含量水平不单单只反映肿瘤生长进展，也可以在正常人体内呈现相关的波动性变化。一般来说，恶性肿瘤患者cfDNA的含量高于无肿瘤患者，但是人们依旧可以在良性病变、炎症、组织创伤中进行定量化来进行区分。到现今为止，是什么生理因素的改变导致癌症的发生和进展依旧没有研究彻底，但是可以通过对循环肿瘤细胞游离DNA(ctDNA)的研究就能对肿瘤的发生及其进展进行监测，了解其相关突变基因。此外，循环miRNAs最近也被证明是潜在的癌症生物标记物。

细胞游离DNA(Cell free DNA，缩写为cfDNA)通常是指长度为峰值约为167bp的双链DNA小片段，常出现在外周血或其它组织液中，主要来源于自身正常细胞的凋亡降解。循环肿瘤DNA(circulating tumor DNA，缩写为ctDNA)是指人体血液循环系统中不断流动的肿瘤来源的DNA片段，这些片段携带了很多关于肿瘤的信息，包括基因突变、缺失、插入、重排、拷贝数异常及甲基化等。这些信息可用于检测肿瘤早期诊断、进展过程、预后判断及个性化用药指导，可见检测循环肿瘤DNA的信息对于临床的重要性。

不同肿瘤患者体内的cfDNA大部分由其本身正常细胞和癌细胞代谢凋亡释放产生，同时其体内的线粒体和病毒也会造成cfDNA的增多，这些波动都可以被不同的荧光检测(PicoGreen染色发光和紫外线光谱法)或定量PCR(SYBR Green染料法和TaqMan探针法)来进行检测区分。尽管癌症患者比正常健康人群体内的含有更多的cfDNA，但是彼此的血浆和血清中的cfDNA含量差异还是显著明显的。相关研究显示，对于癌症患者每毫升血液中可以得到最少0ng，最多大于1000ng的cfDNA，平均每毫升血液中含有180ng的cfDNA。而正常健康人群中每毫升血液最多可以提取到100ng的cfDNA，平均每毫升30ng。然而很难从这些研究中来确定人体内具体的cfDNA含量，毕竟这些研究调查的患者数量规模较小，而且对于cfDNA的定量方法也不尽相同。由于正常人和癌症患者体内的cfDNA含量有重叠，所以不能单单用cfDNA的含量来诊断受检者是否患有癌症，所以需要将其他肿瘤标志物和cfDNA的含量共同结合来评判。一般在进行手术治疗后，癌症患者体内的cfDNA含量会很快的降低到比正常健康人群平均cfDNA含量还低的水平，如果仍有大量的cfDNA存在，也可表明手术治疗后还有残留的肿瘤组织存在。