[发明专利]用于双样本共建测序文库的Y型接头和双样本共建测序文库的方法

权利要求书

1.一种用于双样本共建测序文库的Y型接头，其特征在于，包括：第一Y型接头和第二Y型接头，其中，所述第一Y型接头包括：

第一序列，包括依次连接的P5、i5、SP1和N1序列，其中，依次连接的所述P5、所述i5和所述SP1即为illumina Y型接头中包含P5的单链核苷酸序列；

第二序列，包括依次连接的L1和N1c序列；

所述第二Y型接头包括：

第三序列，包括依次连接的P7、i7、SP2和N2序列，其中，依次连接的所述P7、所述i7和所述SP2即为illumina Y型接头中包含P7的单链核苷酸序列；

第四序列，包括依次连接的L2和N2c序列；

其中，所述L1、所述L2、所述N1、所述N1c、所述N2和所述N2c均与illumina接头序列及人基因组序列不同且不互补；所述N1与所述N1c互补，所述N2与所述N2c互补，且所述N1与所述N2和所述N2c不同且不互补；所述L1的3’端和所述L2的5’端序具有互补区域；

所述L1的3’端和所述L2的5’端序具有15～25bp的互补区域；所述N1、所述N1c、所述N2和所述N2c的长度为10～20bp；所述L1的3’端和所述L2的5’端序具有20bp的互补区域；

所述第一序列具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，所述第二序列具有如SEQ IDNO：2所示的核苷酸序列，所述第三序列具有如SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列，以及所述第四序列具有如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。

2.根据权利要求1所述的Y型接头，其特征在于，所述第一序列和所述第四序列的3’末端添加碱基T和硫代修饰，所述第二序列和所述第三序列的5’末端做磷酸化修饰。

3.一种双样本共建测序文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：

分别采用不同的接头对两个待测样本进行单样本建库，得到第一测序文库和第二测序文库，其中，用于所述第一测序文库和所述第二测序文库构建的接头中具有能够通过PCR扩增将所述第一测序文库和所述第二测序文库连接在一起的序列；

将所述第一测序文库和所述第二测序文库混合，通过PCR扩增将所述第一测序文库和所述第二测序文库连接在一起得到双样本测序文库；

采用如权利要求1至2中任一项所述的用于双样本共建测序文库的Y型接头进行双样本共建测序文库。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，用于所述第一测序文库和所述第二测序文库构建的接头中具有互补序列，通过重叠延伸PCR法将所述第一测序文库和所述第二测序文库连接在一起。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

S1，分别采用第一Y型接头和第二Y型接头对两个待测样本进行单样本建库，得到第一测序文库和第二测序文库；

S2，将第一测序文库和第二测序文库混合，通过重叠延伸PCR法将所述第一测序文库和所述第二测序文库连接在一起得到双样本测序文库。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述S1包括：

接头连接步骤，对其中一个待测样本连接所述第一Y型接头，对另一个待测样本连接所述第二Y型接头；以及

扩增步骤，采用具有P5和L1序列的引物对对连接有第一Y型接头的待测样本进行扩增，得到第一测序文库，采用具有P7和L2序列的引物对对连接有第二Y型接头的待测样本进行扩增，得到第二测序文库。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述具有P5序列的引物具有如SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列，所述具有L1序列的引物具有如SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列，所述具有P7序列的引物具有如SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列，所述具有L2序列的引物具有如SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列。