[发明专利]一种糖化血红蛋白高压液相色谱层析柱制备工艺

说明书

本发明公开了一种糖化血红蛋白高压液相色谱层析柱制备工艺，包括以下制备步骤层析柱填料活化制备，称取一定量的强阳离子交换树脂，加0.01～1.2mol/LNaOH溶液，搅匀，置室温一定时间，其间搅拌至少一次以上；随后加入浓盐酸数滴，调至Ph5.0～7.5，除去上清液，并用蒸馏水洗多次；层析柱的装填灌装，称取上述适量填料，用匀浆液使之分散，将匀浆液倒入与色谱柱管连接好的匀浆管中，调节适宜的压力，用顶替液压匀浆液到色谱柱中，待压力稳定下来，保持一定的时间，然后调低压力使之稳定，接着缓慢调小压力直至到0，卸下色谱柱，填料应略微冒出柱管且柱口填料保持平整，盖上筛板和盖帽，即完成色谱柱的装填。

技术领域

本发明具体涉及一种糖化血红蛋白高压液相色谱层析柱制备工艺，属于糖化血红蛋白高压液相色谱层析柱制备技术领域。

背景技术

高效液相色谱法是国际临床化学联合会(IFCC)推荐的测定糖化血红蛋白的参考方法。其基本原理是：血红蛋白的糖化会导致血红蛋白分子表面电荷丢失，不同组分的糖化血红蛋白分子表面电荷丢失的程度也不同，经处理过的阳离子交换树脂带负电荷，与带正电荷的糖化血红蛋白有亲和力。用不同梯度的洗脱液将不同组分的糖化血红蛋白分子洗脱下来，并用检测器对分离后的各种糖化血红蛋白组分的吸光度进行检测。以百分率表示糖化血红蛋白的检测结果。但是该方法也存在以下问题：高压液相色谱层析柱是分析分离的核心，而层析柱的制备的好坏则影响柱效性能的高低。

发明内容

针对上述背景技术存在的问题，本发明旨在提供一种糖化血红蛋白高压液相色谱层析柱制备工艺。

为此，本发明采用以下技术方案：一种糖化血红蛋白高压液相色谱层析柱制备工艺，其特征是包括以下制备步骤：

第一步层析柱填料活化制备，称取一定量的强阳离子交换树脂，加0.01～1.2mol/LNaOH溶液，搅匀，置室温一定时间，其间搅拌至少一次以上；随后加入浓盐酸数滴，调至Ph5.0～7.5，除去上清液，并用蒸馏水洗多次；

第二步层析柱的装填灌装，称取上述适量填料，用匀浆液使之分散，将匀浆液倒入与色谱柱管连接好的匀浆管中，调节适宜的压力，用顶替液压匀浆液到色谱柱中，待压力稳定下来，保持一定的时间，然后调低压力使之稳定，接着缓慢调小压力直至到0，卸下色谱柱，填料应略微冒出柱管且柱口填料保持平整，盖上筛板和盖帽，即完成色谱柱的装填。

作为对上述技术方案的补充和完善，本发明还包括以下技术特征。

所述的填料粒度的直径为要1.2～10微米。

所述的强阳离子交换树脂基质为苯乙烯和二乙烯基苯的共聚物，具有刚性，球形，单分散多孔等特征。

装填灌装所述的层析柱的装填装置包括空压机、气动增压泵、调压器或压力表、色谱柱管、匀浆罐。

所述的装填压力范围是5～45MPa；装填时间范围是5～95min。

本发明可以达到以下有益效果：本发明采用固定相树脂为强阳离子交换剂，基质为苯乙烯和二乙烯基苯的共聚物，具有刚性，球形，单分散多孔等特征。另外，本发明采用1.2～10微米的填料粒度，在可接受的柱压下具有较好的柱效

附图说明

图1为本发明的制备的层析柱能够分离糖化血红蛋白各个组分示意图。

具体实施方式

本发明具体实施和研发过程如下：

1、装填材料，粒径