[发明专利]检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒及其制法

说明书

本发明涉及一种新型的从被测样本中检测低密度脂蛋白受体相关蛋白4（LRP4）抗体的电化学发光试剂盒及其制备方法。制备的试剂盒包括：包被链霉亲和素的磁珠微粒工作液，生物素标记的LRP4工作液，三联吡啶钌标记的抗人IgG抗体工作液，抗LRP4抗体的校准品和/或质控品工作液，含三丙胺的电化学发光底物液，以及清洗液。所制备试剂盒的发光体系为电化学发光，利用链霉亲和素‑生物素生物反应信号放大系统，检测速度快、灵敏度高、线性范围宽、检测结果重复性好，能够实现样本中抗LRP4抗体的准确定量检测。

技术领域

本发明涉及一种检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒及用法，属于免疫分析技术领域。

背景技术

重症肌无力(MG)是一种自身免疫性疾病，它是一种自身抗体介导、补体参与、细胞免疫依赖的神经肌肉接点(NMJ)处神经递质的信号传递障碍。MG人群发病率为(32～64)/10万，我国目前约有60万MG患者^[1]。其主要临床表现为骨骼肌无力、易疲劳，活动后加重，休息和应用胆碱酯酶抑制剂后症状明显缓解、减轻。其特点是发病率高、致残率高、预后差、易复发，已经严重威胁到人类的生活和健康，得到了医疗、科研工作者的广泛关注。

如上所述，MG为自身抗体介导的免疫疾病，其主要靶抗原是NMJ突触后膜的乙酰胆碱受体(AChR)和肌肉特异性酪氨酸激酶(MuSK)。约有80％的MG患者为抗AChR抗体阳性的MG，称为AChR-MG；仅有不足10％的MG患者属于抗MuSK抗体阳性的MG，称为 MuSK-MG^[2]。然而，仍有少部分MG患者血清抗AChR抗体和抗MuSK抗体均呈阴性，这部分 MG被称之为血清双阴性重症肌无力^[3]。

LRP4是一个低密度脂蛋白受体家族成员，是由一个跨膜结构、一个长的细胞外N末端以及一个短的细胞内C末端组成的单跨膜蛋白，是对MuSK激活、AChR聚集和NMJ形成至关重要的蛋白的受体。2013年，美国乔治亚医学院的梅林课题组发现并证实了抗LRP4抗体的致病性，可以诱导MG样表现^[4]。抗LRP4抗体的病理作用主要是通过干扰LRP4和agrin的结合，破坏AChR介导的神经肌肉信号转导。目前，抗LRP4抗体已被鉴定为自身免疫性疾病的第三个病因，在血清双阴性重症肌无力患者中，其阳性率为7％～33％^[5]，它能够单独或与抗AChR抗体、抗MuSK抗体等共同导致MG发生。与AChR-MG和MuSK-MG相比，抗LRP4抗体阳性的MG病症状较轻，多为眼肌型^[6]，极少伴随胸腺瘤或出现肌无力危象，对药物治疗的反应良好。抗LRP4抗体阳性检出率与种族、地域、性别、年龄相关。抗LRP4抗体检测技术的标准化将有助于进一步评估其特异与其临床表型的相关性。我国针对该指标相关报道仍然较少，对该抗体引起MG的研究亟待进行。

虽然文献报道的检测抗LRP4抗体的方法很多^[6-9]，包括间接荧光免疫法、酶联免疫吸附法、放射免疫沉淀法、荧光免疫沉淀法、细胞荧光免疫染色法等，但这些方法均未形成比较完善的体系，均未在临床上普及。建立高灵敏度、高特异性的检测抗LRP4抗体方法是尚待解决问题。

电化学发光免疫分析法是继酶联免疫分析、放射免疫分析、荧光免疫分析之后的新一代标记免疫测定技术，具有高度敏感、特异性强、测定范围宽、试剂稳定、操作简单等优点。目前尚未有文献报道电化学发光免疫分析法检测抗LRP4抗体的研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：为解决现有技术中尚未有高灵敏度、高特异性的定量检测抗LRP4抗体的方法或试剂盒的技术问题，提供一种检测抗LRP4抗体的电化学发光试剂盒及制法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：