[发明专利]一种间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白及其单克隆抗体的制备

权利要求书

1.一种间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白，其特征在于所述间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白的氨基酸序列是运用四个甘氨酸作为连接短肽，将间日疟原虫乳酸脱氢酶蛋白的A优势抗原表位氨基酸序列以及B优势抗原表位氨基酸序列串联后三次重复组成，其中：间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No: 1所示，间日疟原虫乳酸脱氢酶蛋白的A优势抗原表位氨基酸序列如SEQ ID No: 2所示，间日疟原虫乳酸脱氢酶蛋白的B优势抗原表位氨基酸序列如SEQ ID No: 3所示。

2.一种核苷酸序列，其特征在于该核苷酸序列如SEQ ID No: 4所示，可编码权利要求1所述的重组蛋白。

3.一种质粒载体，其特征在于该质粒载体含有权利要求2所述的核苷酸序列。

4.一种采用权利要求3所述质粒载体转化的菌株。

5.权利要求1所述间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白用于单克隆抗体的制备，其特征在于包含以下步骤：

（a） 人工设计并辅以计算机模拟间日疟原虫乳酸脱氢酶抗原的优势表位，化学合成包含BamHI和EcoRI酶切位点的核苷酸序列；

（b） 将化学合成产物BamHI和EcoRI双酶切后连接至同样BamHI和EcoRI双酶切的pET-28a (+) 载体中，构建pET28-LDH重组质粒；

（c） 重组质粒转化至大肠杆菌中诱导表达，纯化透析即得SEQ ID No: 1所示氨基酸序列的间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白；

（d） 重组蛋白多次免疫Balb/c小鼠后，取其脾脏细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合，经多轮筛选得到杂交瘤细胞株；

（e） 纯化单克隆抗体并分别标记荧光微球，正交实验确定最佳单抗配对组合。